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TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测痰结核分枝杆菌异烟肼耐药效果的评价
目的 评价通过检测结核分枝杆菌katG基因突变以诊断异烟肼耐药并检测结核分枝杆菌的TaqManMGB荧光定量PCR方法.方法 收集临床诊断为肺结核病的患者痰样本,用已建立的荧光PCR方法进行检测,与常规痰涂片抗酸染色、分技杆菌培养和传统比例法药敏试验比较,评价检测结核分枝杆菌敏感性和特异性及异烟肼耐药的特异性和敏感性.统计学分析采用x2检验,P值＜0.05为差异有统计学意义.结果 荧光定量PCR共检测186份痰液样本,敏感性为84.47％,特异性为100.00％.在确诊病人的痰液中阳性检出率84.47％,明显高于痰涂片4099％(x2=46.44,P＜0.01),痰培养40.37％ (X2=47.89,P＜0.01),且差异有统计学意义.其中荧光PCR在菌阳痰液中检出率94.44％,涂阴培阴的痰液中检出率75.28％.与常规药敏试验结果比较,培养阳性的61份痰样本的药敏符合率96.72％ (59/61),敏感性33.33％(1/3),特异性100.00％ (58/58).结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速诊断痰液中的结核分枝杆菌及其异烟肼耐药性.
关键词： 结核分枝杆菌 耐药 异烟肼 TaqMan-MGB荧光定量PCR -
TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌katG基因突变
目的 建立一种特异、灵敏、快速检测结核分枝杆菌katG基因突变的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法.方法根据结核分枝杆菌katG基因315位点突变的特点,设计一对特异性TaqMan-MGB探针和引物,通过反应条件优化,建立荧光定量PCR方法；用克隆到PMD18-T载体上katG基因阳性标准品及不同菌株来评价该方法的特异性、敏感性和重复性.结果 灵敏度高,检测目的基因的低检测下限10 copies/μL,比常规PCR灵敏高100倍；特异性高,检测16株非结核分枝杆菌标准株和7种常见呼吸道感染细菌的标准株均为阴性；与测序法相比,野生型和突变型探针的敏感性和特异性均为100％.重复性好,批内批间CT值变异系数均小于1％.结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速检测结核杆菌菌株katG 315位点突变.
