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GFP标记的重组腺病毒在消毒效果评价中的应用研究
目的 研究GFP标记的复制缺陷型腺病毒在消毒剂灭活病毒试验中应用的可行性.方法 采用商品化Ad-easy系统经同源重组包装GFP标记的复制缺陷型腺病毒,扩增后进行荧光计数和复制缺陷性能检测,其作为指示病毒进行病毒灭活试验.结果 腺病毒基因同源重组后转染AD-293细胞出现绿色荧光和细胞病变,成功包装出病毒颗粒,扩增后经荧光计数病毒滴度为4.20×106 gfu/ml.盲传3代后,感染Vero细胞未出现荧光和细胞病变,表明无子代病毒的产生.以有效氯含量200 mg/L消毒剂作用于腺病毒20 min后,杀灭对数值为4.10.结论 荧光标记的复制缺陷型腺病毒在含氯消毒剂对病毒杀灭能力检测评价中具有一定的可行性,更为高效和安全.
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可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达
背景：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导30余种人类肿瘤细胞凋亡．在抗肿瘤治疗中具有广阔应用前景.目的:构建携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,鉴定其在肝癌细胞株中的表达.方法:以重叠延伸聚合酶链反应(PCR)扩增白细胞介素(IL)-2信号肽和TRAIL膜外区融合片段,克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV．转化含复制缺陷型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌pAdBJ5183,经细菌内同源重组产生重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL,以脂质体法转染HEK293细胞包装病毒,感染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.结果:成功构建了携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体.病毒感染HepG2细胞48 h后．超过95％的细胞中出现绿色荧光.结论:所构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL可在肝癌细胞中高效表达可溶性TRAIL．为进一步行肿瘤TRAIL基因治疗提供了实验依据.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 自细胞介素2 腺病毒科 复制缺陷 遗传载体
