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去甲斑蟊素对U87MG细胞增殖的影响
目的：探讨去甲斑蟊素对神经胶质瘤U87MG细胞生物学行为的影响。方法：用MTT法检测不同浓度的去甲斑蟊素对U87MG细胞增殖的抑制作用。用ELISA实验检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平。结果：MTT结果表明去甲斑蟊素对U87MG细胞的增殖有抑制作用，并随浓度增加抑制作用增强；ELISA实验提示去甲斑蟊素抑制U87MG细胞分泌VEGF蛋白。结论：去甲斑蟊素可以抑制U87MG细胞增殖，抑制肿瘤新生血管的形成。
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阿司匹林对肿瘤相关巨噬细胞YKL-40影响的实验研究
目的 研究阿司匹林对肿瘤相关M2型巨噬细胞分泌YKL-40的影响.方法 分别培养肿瘤相关M2型巨噬细胞和胶质母细胞瘤U87MG;采用Transwell小室共同培养肿瘤相关M2型巨噬细胞与胶质母细胞瘤U87MG并用不同浓度的阿司匹林(0mM;2mM;4mM;8mM)进行干预,24h后收集样本.采用免疫组化方法检测与胶质母细胞瘤U87MG共同培养M2型巨噬细胞YKL-40的表达,并用酶联免疫吸附法(ELISA)检测收集样本中M2型巨噬细胞YKL-40的分泌,并分析实验结果.结果 与胶质母细胞瘤U87MG共同培养M2型巨噬细胞可以表达YKL-40,而且当用阿司匹林干预其浓度达到4mM以上时,可以明显抑YKL-40的分泌量,且呈浓度依赖性,具有明显的统计学意义.结论 与胶质母细胞瘤U87MG共同培养M2型巨噬细胞可以表达YKL-40,并且阿司匹林可以抑制M2型巨噬细胞分泌的成血管因子YKL-40.
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IL-17真核表达载体的构建及其在胶质瘤细胞株U87MG中的表达与筛选
IL-17可以通过多种途径促进肿瘤发展,前期工作发现胶质瘤组织中IL-17高表达,本研究拟构建IL-17真核表达载体pEGFP-N1-IL-17,并且稳定转染胶质瘤细胞株U87MG,为研究IL-17在胶质瘤中作用提供基础.取血小板减少性紫癜自愿患者外周血2ml,Ficoll分离PBMC,提取RNA后经含BamH Ⅰ及Sal Ⅰ酶切位点引物逆转录成cDNA,连接T载体,酶切后与经相同酶切的载体pEGFP-N1连接,卡那霉素筛选,重组载体经Xfect试剂转染胶质瘤细胞U87MG,以G418筛选,单克隆阳性株扩大培养,经荧光、Real Time PCR及ELISA鉴定.构建真核表达载体pEGFP-N1-IL-17测序正确.经荧光、Real Time PCR、ELISA检测稳定转染细胞株pEGFP-N1-IL-17-U87MG成功,IL-17转染后U87MG细胞MCP-1分子表达下调.因此,本研究成功构建IL-17真核表达载体pEGFP-N1-IL-17,并稳定转染U87MG,为研究IL-17在胶质瘤中作用提供了基础.
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积雪草酸通过抑制耐药相关蛋白表达增强U87MG胶质瘤细胞对紫杉醇的敏感性
目的:探索积雪草酸(asiatic acid,AA)对紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药性胶质瘤细胞的抑制作用及其可能的作用机制.方法:CCK-8实验、实时荧光定量PCR、Western blotting检测AA对成胶质细胞瘤U87MG细胞的增殖、凋亡的影响.浓度递增法构建PTX耐药性细胞株PR-U87MG,以U87MG细胞为对照,CCK-8实验验证PR-U87MG细胞对PTX的耐药性,实时荧光定量PCR、Western blotting检测PR-U87MG细胞中MDR1、LRP mRNA及蛋白的表达水平.AA和PTX单独或联合处理PR-U87MG细胞,CCK-8实验、实时荧光定量PCR、Western blotting检测各组细胞增殖活力及凋亡的变化.结果:成功构建PTX耐药性细胞株PR-U87MG.AA可以剂量依赖方式抑制U87MG细胞和PR-U87MG细胞的增殖活力(P＜0.01),并明显促进其凋亡(P＜0.01).与AA或PTX单独处理组相比,联合处理组中PARP1的蛋白水平显著减少(P＜0.01),caspase 3的裂解量显著增加(P＜0.01),耐药相关蛋白P-糖蛋白1(P-dycoprotein 1,Pgp-1)和LRP表达水平显著减少(P＜0.01).结论:AA可有效增强U87MG胶质瘤细胞株对PTX的敏感性,其机制可能与AA抑制具有药物排出功能的耐药蛋白Pgp-1和LRP表达有关.
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Nemo-like kinase(NLK)在胶质瘤细胞U87MG凋亡中作用的研究
目的 探讨Nemo-like kinase(NLK)在胶质瘤细胞U87MG凋亡中的作用.方法 建立NLK的过表达和小干扰质粒干扰NLK在胶质瘤细胞株U87MG中的表达.CCK-8和细胞免疫印迹的方法检测NLK和胶质瘤细胞U87MG凋亡指标caspase-3的关系.结果 构建的过表达和小干扰质粒能明显地影响NLK的表达.CCK-8和细胞免疫印迹的结果显示NLK能够诱导胶质瘤细胞U87MG的凋亡.结论 NLK能够通过激活经典的凋亡途径而诱导胶质瘤细胞U87MG的凋亡.
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ADAM17对U87MG胶质瘤细胞增殖与侵袭的影响及作用机制
目的 探讨ADAM17在U87MG细胞增殖与侵袭中的作用及机制.方法 收集人脑胶质瘤组织65例(肿瘤组)与正常脑组织13例(对照组),采用免疫组化、RT-PCR法,检测ADAM17蛋白及mRNA的表达;利用siRNA干扰敲减或ADAM17激活剂(PMA)过表达ADAM17,并予以PI3K抑制剂抑制相关信号通路,MTT及Transwell实验检测各组U87MG细胞的增殖与侵袭变化,Western blot检测ADAM17、p-AKT及AKT蛋白变化.结果 胶质瘤组织中ADAM17mRNA及蛋白水平均高于正常脑组织;与对照组相比,siRNA干扰后,低表达组U87MG细胞的增殖与侵袭能力下降,而激活剂PMA增强ADAM17后,过表达组细胞增殖与侵袭能力增加,差异有统计学意义(P＜0.05);敲减及过表达AD-AM17可导致PI3 K/AKT信号通路下游蛋白发生变化.结果 ADAM17可通过激活PI3K/AKT信号通路促进U87MG细胞增殖与侵袭,有望为胶质瘤的治疗找到新突破点.
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微小RNA-17-5p在脑恶性胶质瘤患者血清和肿瘤组织的表达及其对U87MG和U251体外作用
目的 观察恶性胶质瘤患者肿瘤组织与血清微小RNA(miRNA,miR)-17-5p的表达,以及miR-17-5p对恶性胶质瘤细胞株U87MG和U251的体外作用.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测恶性胶质瘤患者肿瘤组织与血清miR-17-5p的表达水平;将U87MG和U251细胞用化疗药物20 μmol/L顺铂(DDP),50 μmol/L替莫唑胺或30 Gy伽马射线处理后检测miR-17-5p表达变化;将U87MG和U251细胞转染miR-17-5p mimic,并用无血清培养,检测miR-17-5p在无血清条件对细胞存活的作用;将U87MG和U251细胞转染miR-17-5p mimic,测定其细胞增殖、细胞迁移、集落形成以及肿瘤蛋白p53可诱导核蛋白1(TP53INP1)、Tripartite基序蛋白8(TRIM8)和含BTB结构域的锌指蛋白(ZBTB4)蛋白表达量的变化.结果 通过RT-qPCR检测可见恶性胶质瘤患者肿瘤组织(7.40±1.55)和血清(2.70 ±0.55) miR-17-5p的表达较癌旁组织和健康人血清明显升高(P =0.019和P=0.028),同时采用化疗药物20 μmol/L DDP、50 μμmol/L替莫唑胺或30Gy伽马射线处理U87MG和U251细胞后,其miR-17-5p的表达量也明显上升(P=0.001).将U87MG和U251细胞转染miR-17-5p mimic,并用无血清培养结果表明,miR-17-5p能够促进U87MG和U251在无血清条件下的细胞存活,同时检测显示miR-176P在低浓度(2.5％)血清下可以促进U87MG和U251细胞迁移[(20.50±2.33) mm和(14.50±1.35) mm],促进U87MG和U251集落形成[(225±45)个和(312±58)个],而在高浓度血清(10％)条件下,miR-17-5p并不能促进U87MG和U251细胞迁移,反而会抑制细胞增殖,表明miR-17-5p能够降低抑癌基因TP53INP1、TRIM8和ZBTB4蛋白表达.结论 恶性胶质瘤患者血清和组织miR-17-5p表达增加,同时miR-17-5p对于恶性胶质瘤细胞株U87MG和U251在不良环境中的细胞生存具有促进作用.
关键词： 恶性胶质瘤 微小RNA-17-5p U87MG U251 -
PET显像剂18F-AlF-NOTA-PRGD2的肿瘤靶向性
目的：研究新型PET受体靶向显像剂18F-AlF-NOTA-PRGD2用于肿瘤显像的可行性。方法18F-AlF-NOTA-PRGD2采用18氟-氟化铝（18F-AlF）与NOTA-PRGD2在100℃下通过鳌合反应标记制备而得。荷脑胶质瘤U87MG裸鼠经尾静脉注射18F-AlF-NOTA-PRGD2后行体内放射性生物学分布和PET/CT、microPET/CT显像研究。结果18F-AlF-NOTA-PRGD2采用一步法成功标记，反应时间15~20 min，标记产率为17%~25%。体内放射性生物学研究显示该显像剂能靶向肿瘤病灶，静脉注射后1 h和2 h肿瘤摄取量分别达4.14±1.44、2.80±1.18%ID/g（t=1.910，P=0.070），肿瘤/脑比值分别达2.95±0.61、5.21±2.62（t=-1.686，P=0.167）。PET/CT和microPET/CT显像均可清楚显示该显像剂在荷瘤鼠体内的放射性分布情况，肿瘤显像清楚，体内分布良好，但microPET/CT图像质量明显优于PET/CT。结论18F-AlF-NOTA-PRGD2标记简单、易行，在荷瘤鼠体内具有优良的肿瘤靶向性，可发展成为PET肿瘤显像剂。
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U87MG培养上清致Na(1)ve CD4分化为Th2细胞的能力降低
目的 肿瘤微环境或者肿瘤细胞本身对免疫细胞的分化具有定向诱导作用,本研究目的在于了解胶质瘤细胞株U87MG外泌分子对Na(i)ve CD4细胞分化可能的影响.方法 外周血 PBMC中分离Na(i)ve CD4细胞,U87MG培养液上清以1/5量加至Na(i)ve CD4细胞培养体系中,培养7d,检测Na(i)ve CD4细胞分化增殖情况以及分化为Th1 、Th2、Th17、Treg四个亚群量的变化.结果 加有1/5量U87MG培养上清的Na(i)ve CD4细胞分化成Th2减低,较对照组有显著性差异8.17％±2.08％vs 9.63％±2.48％(P＜ 0.05),Th1较对照组均值低,但无显著性差异,Th17、Treg细胞在2组之间无明显差异.结论 观察到U87MG外泌分子Na(i)ve CD4分化为Th2细胞能力减弱,同时初步观察了Na(i)ve CD4细胞分化为其他亚群的变化规律,为理解肿瘤细胞对Na(i)ve CD4细胞分化影响提供了实验基础.
关键词： Na(i)ve CD4 U87MG 胶质瘤 Th2
