首页 > 文献资料
-
阳离子磷酸胆碱聚合物载AT1受体反义寡核苷酸转染大鼠心肌成纤维细胞的研究
目的:探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体的反义寡核苷酸(AS-ODN)对离体培养的大鼠心肌成纤维细胞 AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法:MTT 法检测 MPC与心肌成纤维细胞的细胞相容性;应用激光扫描共聚焦显微镜(CLAM)检测复合物在细胞内的定位,流式细胞仪(FCM)检测转染效率及荧光强度, Western blot检测AT1受体蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:MPC浓度>40μg/mL时才出现明显细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围,少量分布于细胞核内。流式结果显示转染效率及荧光强度随N/P比增加而明显增大。Western blot结果显示,转染复合物后各组细胞AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白的表达也相应减少。结论:MPC30-DEA70在安全浓度范围内就能够携带AT1R-ASODN以较高的转染率进入离体培养的大鼠心肌成纤维细胞,并成功靶向抑制AT1R及Ⅰ型胶原蛋白的表达。从而可以推断阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载反义寡核苷酸(AS-ODN),靶向性抑制基因的表达,为新型非病毒性基因载体的研究提供了一定的理论依据。
-
NF-κB亚单位p65反义脱氧寡核苷酸治疗胰腺癌的实验研究
核因子-κB(NF-κB)是细胞分裂和生存的关键调节因子,参与肿瘤发生、增殖、转移等多方面的调控环节,在胰腺癌的发生、发展过程中发挥着重要作用.
-
高血压RAS系统相关基因治疗进展
原发性高血压病是由遗传与环境因素相互作用而导致的多基因遗传病,遗传因素对其发病的影响占30%-50%[1].目前有关高血压基因治疗的研究很多,肾素血管紧张素系统(RAS)是研究的热点之一.1.肾素血管紧张素系统降低基因表达(亦称反义基因疗法)是指根据靶基因结构特点设计反义寡核苷酸(AS-ODN)分子,导入靶细胞或机体后与双链DNA或与mRNA结合形成杂合体,从而封闭或抑制升高血压相关基因的复制或表达,以期达到降压目的.RAS的过度活动是人类原发性高血压及许多高血压动物模型主要病理机制之一.
-
tTG AS-ODN抑制培养的牛眼小梁细胞表达纤维连接蛋白的研究
目的 观察组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)AS-ODN(AS-ODN)对体外培养牛眼小梁细胞(BTMCs)纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法 设空白对照组、tTG AS-ODN1组和tTG AS-ODN2组.在脂质体介导下,将0.3μmol/L的tTG AS-ODN转染BTMCs,利用免疫组织化学SP染色法检测BTMCs表达FN情况,采用半定量RT-PCR和Western blot方法检测表达的变化.结果 免疫组织化学结果显示,AS-ODN1和AS-ODN2组灰度均值与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),AS-ODN1和AS-ODN2组差异无统计学意义(P=0.91).RT-PCR结果显示,AS-ODN1和AS-ODN2组FN/β-actin条带中心密度比与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),AS-ODN1和AS-ODN2组差异无统计学意义(P=0.73).Western blot结果显示,AS-ODN1和AS-ODN2组FN/β-actin灰度比值与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),AS-ODN1和AS-ODN2组差异无统计学意义(P=0.92).结论 tTG可以促进BTMCs表达ECM.通过tTG AS-ODN抑制BTMCs表达FN等细胞外基质(ECM),有望从基因水平上防治原发性开角型青光眼(POAG).