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氨基酸氧化分解文献资料
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LC-MS/MS方法定量测定人血浆中亮氨酸浓度及13C-亮氨酸丰度
目的:为了考察进食状态下不同时间点氨基酸的氧化分解状态,从而了解机体对氨基酸的需要量,建立了一种灵敏、特异、高效的同时检测血浆中亮氨酸浓度及13C亮氨酸丰度的LC-MS/MS定量分析方法.方法:用乙腈沉淀蛋白法处理血浆样本.采用Atlantics色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5 μm);流动相为乙腈-水(0.1％甲酸)(5∶95),流速为1 mL·min-,进样量为20 μL.采用串联四极杆质谱在ESI正离子电离模式下,应用多反应监测(MRM)扫描模式测定亮氨酸(m/z 132.1→86.0)和13C-亮氨酸(m/z 133.1→86.0).样品分析时间为3 min.结果:血浆中亮氨酸的浓度在50～ 1000 nmol·mL-1范围内,13C-亮氨酸/亮氨酸的摩尔浓度比值在0.01 ～0.5范围内线性关系良好(r＞0.99),日内、日间精密度和准确度符合要求.稳定性考察项目的结果均符合要求.结论:本文建立了同时测定血浆中亮氨酸浓度和13C-亮氨酸丰度的LC-MS/MS方法.该方法灵敏度高,特异性好,各项方法学考核的结果均符合要求,可用于考察氨基酸氧化分解状态的临床研究.
