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HPLC-MS/MS法同时测定小鼠生物样品中葛根素和梓醇的浓度
目的:建立同时检测小鼠血浆、脑匀浆中葛根素和梓醇浓度的HPLC-MS/MS法,为梓葛制剂的药动学研究提供检测方法.方法:分别以对羟基苯甲醛和桃叶珊瑚苷为葛根素、梓醇的内标物,血浆或脑匀浆沉淀蛋白后,采用HPLC-MS/MS法同时检测各物质.色谱条件:采用Eclipse plus C18(100 mm×4.6 mm,3.5 μm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L-1乙酸胺(含0.1％甲酸)(80∶20)为流动相,流速0.6 mL·min-1,柱温30℃;质谱条件:电喷雾离子化源,多重反应监测,葛根素和对羟基苯甲醛采用负离子方式(选择监测离子反应分别为m/z 415.0→295.0和m/z 120.9→91.8),梓醇和桃叶珊瑚苷采用正离子方式(选择监测离子反应分别为m/z380.4→183.0和m/z 364.2→167.0).按中国药典规定进行相应的方法学考察.结果:血浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.056 3～11.3 μg·mL-1(r=0.993 6)、0.398～25.5 μg·mL-1(r=0.995 9),定量下限(LLOQ)分别为0.0563 μg·mL-1、0.0398 μg·mL-1;脑匀浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.0282～225 μg·mL-1(r=0.9964)、0.019 9～2.25 μg·mL-1(r=0.998 5),LLOQ分别为0.0282 μg·mL-1、0.019 9μg·mL-1.葛根素和梓醇日内、日间精密度均小于15％,准确度为81.7％～110.0％,相对提取回收率为81.3％～105.0％,基质效应的RSD均小于15％.小鼠灌胃梓葛纳米晶混悬液后,小鼠血浆中葛根素和梓醇的t1/2分别为(2.14±1.13)h和(1.70±0.41)h,脑匀浆中的t1/2分别为(4.30±1.63)h和(3.88±1.09)h;血浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为(7.40±3.05)mg·L-1·h-1和(32.13±5.29)mg·L-1·h-1,脑匀浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为(1.29±0.42) mg·L-1·h-1和(0.54±0.16)mg· L-1·h-1.结论:该法专属性强,灵敏、准确、快捷,适用于梓葛配伍制剂的药动学研究.
