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LC-MS/MS法测定比格犬血浆中沃诺拉赞浓度及其毒代动力学研究
目的:建立LC-MS/MS法测定比格犬血浆中沃诺拉赞浓度,并进行毒代动力学研究.方法:40只比格犬按体重随机分为溶媒对照组(0.9％氯化钠注射液)和低(1mg·kg-1·d-1)、中(3mg·kg-1·d-1)、高(10mg·kg-1·d-1)剂量组,每组10只,雌雄各半.静脉推注给药,每天1次,连续4周.首、末次给药分别于给药前0h以及给药后1/12、0.5、1、2、4、7、10和24h经犬前肢内侧皮下静脉取血.用蛋白沉淀法处理血浆样品,LC-MS/MS分析.色谱柱:ODS柱(2.1 mm× 100mm,5μm);流动相:0.1％甲酸水溶液(氨水调pH至3.24)-乙腈(60∶40,v/v),流速:0.2mL·min-1;内标:兰索拉唑;MS源:ESI,正离子MRM模式检测;定量分析沃诺拉赞10 mg·kg-1和兰索拉唑的监测离子分别为m/z:346.30→315.20,m/z:370.30→252.30.应用DAS2.1软件计算毒动学参数.结果:沃诺拉赞在5～5 000 ng· mL-1线性范围内线性关系良好(r =0.999 6),定量下限为5ng·mL-1.批内和批间精密度(RSD)均＜7.7％,提取回收率均＞91.6％,基质效应在106％～114％间.内标提取回收率为(97.3±0.76)％,基质效应为(100.6±0.90)％.各项稳定性RSD＜4.7％.首次给药比格犬低、中、高剂量组的毒代动学参数分别为Cmax:(0.54±0.03)、(1.30±0.20)、(3.51±0.52) μg· L-1,AUC(0-24):(1.35±0.24)、(5.13±0.94)、(23.74±3.12)mg·h·L-1,t1/2:(1.77±0.30)、(2.37±0.29)、(3.71±0.39)h;末次给药比格犬低、中、高剂量组的毒代动学参数分别为Cmax:(0.53±0.09)、(1.44±0.26)、(5.05±0.64) μg·L-1,AUC(0-24):(1.29±0.25)、(4.92±0.97)、(25.25±2.96)mg·h·L-1,t1/2:(1.56±0.26)、(2.11±0.34)、(3.51±0.33)h.置信区间法评价结果显示,给药范围内沃诺拉赞的AUC(0-24)、AUC(1-∞)和Cmax的置信区间与判断区间部分重叠.结论:本方法灵敏度高,专属性好,稳定性好,结果准确,适用于毒代动力学试验中沃诺拉赞血样的分析.连续给药28 d后药物在比格犬体内无性别差异,无明显药物蓄积,且在1～10 mg·kg-1剂量范围内,药物是否具有线性药代动力学特征尚不能判定.
