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重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子文献资料
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应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和N端测序鉴定重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构
目的:应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和N端测序方法鉴定重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构.方法:1.用Edman降解法进行N端测序.2.应用MALDI-TOF-MS测定分子量并鉴定纯度.3.通过还原、烷基化确定rhGM-CSF分子中二硫键数目.4.通过蛋白内切酶Glu-C酶切的肽质量指纹谱确证氨基酸序列并确证其中两对二硫键的配对.结果:1.测定的rhGM CSF N端15个氨基酸序列与从cDNA推导的序列一致.2.测定的rhGM-CSF分子量与理论计算值一致.3.证明rhGM-CSF没有自由巯基,含有两对二硫键,与理论值一致.4.证明rhGM-CSF的氨基酸序列是正确的,并确证其中的两对二硫键配对正确.结论:确证重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构是正确的,没有修饰、变异和氨基酸的丢失.应用的方法灵敏、准确、可靠.