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多房棘球蚴抗原蛋白 TSP3抗原表位的生物信息学预测#
目的：预测多房棘球绦虫抗原蛋白 TSP3的二级结构和优势抗原表位（T 细胞和 B细胞表位）。方法 Genbank 获取 TSP3的氨基酸序列后通过生物信息学软件 SOPMA 预测二级结构特征，进一步通过在线软件 IEDB、SYFPEITHI、Bcepred 和 ABCpred 预测 TSP3的 T 细胞和 B 细胞表位。同时对 TSP3的亲水性、柔韧性、抗原性及蛋白表面暴露区域的特征进行预测。结果无规则卷曲和β转角分别占 TSP3蛋白质的二级结构的25.68%和4.05%，说明潜在优势抗原性表位存在。通过多种生物信息学方法分析出 TSP3潜在的 T 细胞表位为 T33_42、T45_55、T53_63、T68_77、T80_90、T92_104、T110_122、T134_144；TSP3潜在的 B 细胞表位为 T18_33、T45_55、T53_63、T64_75、T80_90、T92_104、T110_122。结论 TSP3的二级结构特征显示潜在优势抗原性表位存在，预测出8种 T 细胞抗原表位和7种 B 细胞抗原表位，为后续表位疫苗的设计奠定了理论基础。
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多房棘球蚴蛋白TSP3的原核表达及分离纯化
目的 构建适合融合基因pCzn1-TSP3的原核表达系统,纯化获得多房棘球蚴蛋白TSP3.方法 TSP3的基因序列在GenBank中获取,采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法,构建原核表达质粒pCzn1-TSP3,并转化于大肠杆菌Arctic Express (DE3)中,经IPTG诱导,获得目的蛋白,利用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得目的蛋白.结果 经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒pCzn1-TSP3构建成功.进一步实验结果表明TSP3在原核表达系统中主要以可溶蛋白形式存在.继而经Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得TSP3纯蛋白,并经过Western Blot证实.结论 大肠杆菌Arctic Express(DE3)中能够成功表达蛋白TSP3,且Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱能够纯化目的蛋白TSP3.
