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MicroRNA-184靶向作用EPB41L5抑制肾细胞癌存活与迁移研究
目的:研究MicroRNA-184(miR-184)对肾癌细胞存活与迁移的影响,并分析其靶基因及功能.方法:RT-PCR法检测肾细胞癌模型小鼠肿瘤组织及细胞系中miR-184的表达水平.脂质体法转染miR-184 mimic至肾癌细胞A498、786-O,利用平板克隆及Transwell法测细胞克隆形成及迁移能力.生物信息学分析预测miR-184靶基因,荧光素酶报告基因法检测miR-184对靶基因的作用,Western blot法检测靶基因表达量.转染靶基因siRNA检测细胞克隆形成及迁移情况.结果:肾细胞癌小鼠肿瘤组织及肾癌细胞中miR-184表达水平显著降低(P<0.05).转染miR-184mimic后,肾癌细胞的克隆形成能力及细胞迁移数目显著减少(P<0.05).靶基因预测结果表明,EPB41L5的3'-U T R包含miR-184的潜在结合位点.miR-184 mimic转染降低EPB41L5正常3'-U T R载体的荧光素酶活性,而对突变3'-U T R的荧光素酶活性则无影响.EPB41L5 siR-N A转染后,肾癌细胞中EPB41L5表达水平较对照组明显下降,同时,细胞体外克隆形成数目及迁移数目显著减少.结论:miR-184可通过作用靶基因EPB41L5而调控肾癌细胞的存活及迁移能力,影响肾细胞癌的发展.
