您当前的位置:
首页 > 文献资料
所属专业:
亲和力鉴定文献资料
-
靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选
目的:构建 V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体,以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用 Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与 Vsig4蛋白结合的噬菌体,经测序和基因比对所得 VHH 序列,用 ELISA法筛选出抗 Vsig4的高亲和力纳米抗体,并用 Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库,经过克隆筛选获得136个 Vsig4阳性单克隆,经测序获得15个不同的VHH 基因,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的 Vsig4纳米抗体,其中 Nb119的亲和力高,并且可以与 Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的 Vsig4纳米抗体,以期用于检测巨噬细胞表面 Vsig4的表达和构建特异性分子探针。