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在东方拟无枝酸菌中建立Ⅰ-SceⅠ内切酶介导的无标记敲除系统
目的 在东方拟无枝酸菌中建立由Ⅰ-SceⅠ介导的无标记高效重组系统.方法 首先构建可用于东方拟无枝酸菌的Ⅰ-SceⅠ操作盒,通过敲除多烯类化合物ECO-0501合成相关基因hemA2,比较操作盒使用前后获得hemA2基因双交换突变株的效率.结果 在没有引入Ⅰ-SceⅠ的情况下,随机重组的发生几率仅约2％,而导入后,由于Ⅰ-SceⅠ酶对引入DNA位点的双链切割,导致双交换重组的发生率提高至90％以上.结论 Ⅰ-SceⅠ系统是一种可用于东方拟无枝酸菌无标记遗传操作的有效工具.
