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PCR聚合酶链反应文献资料
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PMG-36e-CD::upp重组质粒的构建及鉴定
目的:探讨利用分子生物学基因重组技术构建PMG-36e-CD::upp自杀基因重组质粒的方法.方法:用小量制备质粒DNA的方法分别提取表达型质粒载体PMG-36e和自杀基因pORF-CD::upp,以质粒pORF-CD::upp为模板PCR扩增CD::upp基因,表达型质粒载体PMG-36e与自杀基因CD::upp分别用限制性内切酶Sac Ⅰ与Sal Ⅰ进行双酶切,T4DNA连接酶16℃恒温水浴过夜连接,转化入感受态JM109,筛选单克隆提取重组质粒PMG-36e-CD::UPP进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,双酶切鉴定,PCR鉴定,及测序鉴定.结果:重组质粒PMG-36e-CD::upp经1%琼脂糖凝胶鉴定,分子量为5.5Kb,与其标准分子量大小一致;重组质粒PMG-36e-CD::upp经双酶切鉴定及PCR初步鉴定构建成功;送上海生物工程技术服务有限公司测序认证,同源性达100%.结论:重组质粒PMG-36e-CD::upp可成功构建,可用于后续实验的表达研究.
