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miRNA-155/PU.1信号通路阻滞对大鼠骨髓来源树突状细胞成熟及移植免疫的影响
目的 探讨miRNA-155/PU.1信号通路阻滞对骨髓来源树突状细胞(DCs)成熟及其对应用于大鼠小肠移植中的免疫功能的影响.方法 利用贴壁法培养诱导DCs,针对miRNA-155/PU.1信号通路中关键转录因子PU.1基因设计并合成3对PU.1 siRNA (PU.1沉默组、阴性对照组及对照组),用脂质体法转染细胞,并筛选一对高沉默效率PU.1 siRNA.流式细胞术分析PU.1沉默组、阴性对照组及对照组细胞表面CD80、CD86及主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ的表达；ELISA法检测上清液中IL-10及IL-12p70的水平；混合淋巴细胞反应检测对同种异体T淋巴细胞的增殖作用；在大鼠小肠移植前7d经受体尾静脉等量注射3组细胞,移植后观察各组受体存活情况及移植物病理情况.结果 ①DCs表面分子CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达率在PU.1沉默组分别为(27.0±5.6)％、(23.6±4.8)％及(36.8±6.8)％,阴性对照组分别为(74.0±9.4)％、(76.5±8.7)％及(87.8±11.3)％,PU.1沉默组均分别明显低于阴性对照组(P＜0.05).②PU.1沉默组IL-10水平较阴性对照组明显升高(P＜0.05),IL-12p70则明显降低(P＜0.05).③PU.1沉默组DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖也较阴性对照组明显降低(P＜0.05).④将PU.1沉默组DCs术前注入受体行大鼠小肠移植后,受体平均存活时间为(14.3±3.3)d,明显长于阴性对照组的(7.8±1.5)d (P＜0.05)和对照组的(8.0±2.5)d(P＜0.05),且术后5d时移植物病理显示移植肠组织轻度淋巴细胞浸润和绒毛水肿.结论 体内外实验表明,miRNA-155/PU.1信号通路阻滞的DCs成熟度明显受到抑制,并能稳定发挥诱导受体特异性免疫耐受的作用.
关键词： 树突状细胞 miRNA-155/PU.1 免疫耐受 小肠移植
