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HOTAIR在CD133阳性胃癌细胞中的表达及其作用研究
目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)中的同源基因转录反义基因间RNA(HOTAIR)在人胃癌KATO-Ⅲ细胞中的表达及其作用.方法 采用免疫磁珠分选技术分选出人胃癌KATO-Ⅲ细胞中的CD133阳性和CD133阴性细胞后,再采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测其中HOTAIR mRNA和CD133 mRNA的表达水平;采用小干扰RNA技术(small interfering RNA,siRNA)干扰CD133阳性细胞中HOTAIR的表达后,再采用RT-PCR法检测细胞中HOTAIR mRNA 的表达水平,以筛选出干扰效果好的siRNA用于后续实验;以筛选出的siRNA干扰序列干扰CD133阳性细胞中HOTAIR的表达后,检测细胞中CD133 mRNA、E-钙黏素(E-cadherin) mRNA及N-钙黏素(N-cadherin) mRNA的表达,并开展Transwell实验以检测细胞迁移和侵袭能力的改变.结果 ①RT-PCR检测结果表明,CD133阳性组细胞中CD133 mRNA和HOTAIR mRNA的表达水平均高于CD133阴性组和未分选组(P＜0.05).②siHOTAIR干扰细胞中HOTAIR的表达后,siHOTAIR1组、siHOTAIR2组及siHOTAIR3组细胞中HOTAIR mRNA的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05),且siHOAIR2组细胞中HOTAIR mRNA的表达水平低于siHOTAIR1组及siHOTAIR3组(P＜0.05),表明siHOTAIR2的干扰效果好.③siHOTAIR2组细胞中CD133 mRNA和N-cadherinmRNA的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05),但E-cadherin mRNA的表达水平却高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05);细胞迁移实验和侵袭实验结果均表明,siHOTAIR2组的穿膜细胞数均低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).结论 HOTAIR mRNA在CD133阳性人胃癌KATO-Ⅲ细胞中的表达水平高于CD133阴性细胞,干扰HOTAIR mRNA的表达可下调CD133阳性人胃癌KATO-Ⅲ细胞中CD133 mRNA的表达,并抑制胃癌细胞的迁移及侵袭.
