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骨骼肌m-ATPase染色改良法
我们在实验中发现,用常规的钙钴法很少能保存骨骼肌中ATP酶的活性,且ATP酶对固定非常敏度;而使用未固定的材料骨骼肌中常出现人工假象.固定液的张力很重要,而蔗糖是把张力提高到足够水平的适当添加物.我们将原ATP酶钙钴法作了如下改进:1.固定:将新鲜骨骼肌组织用双面刀片切成约1mm厚的薄片,入固定液中固定10mi n,4℃.固定液配制:多聚甲醛4g;二甲砷酸钠3.08g;氯化钙0.75g;蔗糖 11.5g;双蒸水加至100ml,调节pH值为7.2.2.OCT包埋,-20℃恒冷箱切片(8μm),室温下自然干燥30min.3.切片预处理15min.预处理液配制:0.1mol/L巴比妥钠水溶液2ml,0 .18mol/L氯化钙水溶液2ml,蒸馏水6ml,用0.1mol/L NaOH调节至pH10.35.4.入孵育液60min至75min.孵育液配制:0.1mol/L巴比妥钠2ml; 0.18mol/L氯化钙1ml;蒸馏水7ml;ATP.Na230mg;调节pH 为9.4.5.1%氯化钙洗3次,共10min.6.入2%氯化钴3min.7.蒸馏水充分漂洗.8.入2%硫化铵2min.9.流水冲洗.10.脱水、透明、封片.结果:酶活性反应为不同色调黑褐色,Ⅰ型纤维色淡,Ⅱ型纤维色深.改良后的优点:在冷冻之前,用薄片固定的方法替代了液氮、异戊烷冷冻组织,既节约了开支,又使操作简便,且减少了组织中的冰晶出来;酶活性部位显色深,定位准确.
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在药物安全性评价中组织学技术流程的探讨
药物安全性评价中毒性病理学评价是重要的一个步骤,而毒性病理学评价作为药物安全性评价体系中重要的一环,用以确定损伤靶器官、靶组织的形态及程度变化,评价受试药物是否具有毒性并判断其能否推向临床的重要指标.对组织学技术进行质量控制与评估则是确保毒性病理诊断准确性及一致性的重要前提.该文对组织学技术流程进行叙述并探讨流程中相关影响因素.
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STR和性别位点PCR产物的荧光自动检测
运用荧光染料标记引物、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(denaturing polyacrylamide gel electrophoresis,denaturing PAGE)结合荧光法检测6个STR位点(vWA31A、TH01、F13A1、FES、TPOX、CSF1PO)及1个性别鉴定位点(Amelogenin),就荧光自动检测的重复性、准确性、分辩力等方面进行了研究,建立了6个STR位点等位基因判定视窗及用荧光DNA测序仪进行STR分析的方法,实现电脑自动判读结果.结果表明,本文所述STR和性别鉴定的自动检测方法可靠、分辨力高(可达1bp),所得数据有助于荧光自动DNA分型软件系统的数据积累.
关键词： 荧光DNA自动测序仪 STR分型 性别预选 人工假象
