首页 > 文献资料
-
家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K 562选择性杀伤作用的研究
目的：利用脂多糖刺激家蝇胚胎细胞产生并提取抗菌蛋白，对比研究家蝇胚胎细胞抗菌蛋白和高三尖杉酯碱（HHT）对人髓样白血病细胞K562和正常人体细胞的抑制杀伤作用。方法采用含20mg/L脂多糖的无血清M3培养基作用于处于对数生长期的家蝇胚胎细胞16h，提取上清液中的抗菌蛋白，将抗菌蛋白配制为40、80、160、320和640μg/mL5个浓度组，采用MTT法测定各浓度抗菌蛋白对K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用。将处于对数生长期的K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞配制成相同浓度的HHT组、家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组，两种细胞均采用自身设置对照组。采用流式细胞术测定K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞3组药物的有效杀伤率。结果MTT法检测显示，5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均具有明显抑制作用，各浓度抗菌蛋白对人脐静脉血管内皮细胞均无抑制作用。对照组、HHT组及家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组对K562细胞的有效杀伤率分别为（28．16±2．14）％、（81．41±1．95）％和（82．90±3．03）％；对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率分别为（41．13±2．51）％、（82．20±2．57）％和（36．68±1．86）％。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽与常用的白血病化疗药物相比，优点在于能有效杀伤白血病细胞又不损伤正常人体细胞。
-
家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞A375抑制作用的研究
目的:研究家蝇胚胎抗菌蛋白对肿瘤细胞A375生长的抑制作用.方法:利用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞提取抗菌蛋白,将提取的抗菌蛋白用PBS配制成40、80、160、320及640 μg/mL 5个浓度组,做黑色素瘤细胞A375的MTT实验,实验组采用等量PBS,观察家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对A375的抑制作用,以人脐静脉血管内皮细胞作为正常对照组.结果:MTT检测显示五种浓度抗菌蛋白对A375均有抑制作用,与阴性组相比P＜0.05,差异有显著性.各浓度组对人脐静脉血管内皮细胞无抑制作用,与阴性组相比P ＞0.05,差异无显著性.结论:家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞A375具有明显抑制作用,而对正常人体细胞无抑制.
关键词： 家蝇胚胎细胞 抗菌肽 抗菌蛋白 黑色素瘤细胞A375 人脐静脉血管内皮细胞 抑瘤活性 -
抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定
目的 在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBacTM-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究.方法 构建pFastBacTMHTA质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10细胞,通过蓝白斑筛选,挑取阳性克隆.构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统.构建Bacmid-pFastBacTM-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞,提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白,纯化,SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定.结果 重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞,细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象;培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测,在22 KD出现了1条特异性条带;通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达;通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性.结论 与E.coli BL21(DE3)原核表达系统相比,家蝇胚胎细胞系灵敏度较好,但仍有较大提升空间.
