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胰高血糖素样肽-2对大鼠烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡的影响
目的探讨大鼠烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡情况及胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对其的影响.方法 75只Wistar大鼠随机分为烧伤组、GLP-2治疗组与正常对照组.动物于伤后6、12 h、1、3、5 d处死,检测肠粘膜上皮细胞凋亡数、Caspases-3酶活性及Bcl-2 mRNA表达的变化.结果烧伤后6 h～5 d肠上皮凋亡细胞数较正常组明显增加, GLP-2治疗后在伤后6、12 h、1 d、3 d、5 d均明显低于烧伤组;caspase-3的活性在伤后1 d明显升高,伤后3 d到峰值,然后迅速下降至正常范围内,GLP-2组caspase-3活性只在伤后3 d明显高于伤前,而与烧伤组相比则在伤后1、3 d活性明显降低.肠粘膜Bcl-2mRNA表达在伤后12 h开始低于正常,至伤后5 d仍低于正常, GLP-2组Bcl-2基因表达在伤后1、3、5 d低于于正常组,但与烧伤组相比,GLP-2组在伤后12 h、1 d、3 d、5 d高于烧伤组.结论 GLP-2可降低烧伤后肠粘膜上皮细胞凋亡,其机制可能与降低Caspases-3酶活性,促进Bcl-2mRNA表达有关.
关键词： 烧伤 肠道粘膜 胰高血糖素样多肽-2 凋亡 -
胰高血糖素样多肽 - 2的重组表达及鉴定
目的:构建胰高血糖素样多肽 - 2(GLP - 2)原核表达载体,在大肠杆菌BLR(DE3)中表达,为胰GLP - 2的作用机制的探究奠定基础.方法:人工合成GLP - 2序列,磷酸化后连接到质粒pET31b(+),构建成功的质粒GLP - 2/pET31b(+)转化至BLR(DE3)进行诱导表达,优化条件获得大表达产量;纯化重组蛋白,溴化氰裂解蛋白获得单体蛋白,SDS - PAGE、Western blotting鉴定重组蛋白.结果:成功合成GLP - 2序列,与Genebank收录序列一致;构建原核表达质粒GLP - 2/pET31b(+),测序成功;37℃,OD600 nm为0.8时,加入1 mmol/L的IPTG诱导表达获取较纯的GLP - 2重组蛋白产量较高,溴化氰裂解获得了蛋白的单体.结论:成功构建GLP - 2原核表达载体,该蛋白具有生物活性.确定了优化表达条件,获得了具有生物活性的GLP - 2单体蛋白,为进一步研究奠定基础.
关键词： 胰高血糖素样多肽-2 原核表达 重组蛋白
