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deltex-1基因文献资料
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deltex-1腺病毒载体的构建及其在大鼠bMSCs中的表达
目的 构建deltex-1基因腺病毒载体并研究其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMSCs)中的表达.方法 采用高保真酶PCR扩增deltex-1基因并测序,亚克隆至pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体后在BJ5183细菌中进行重组,挑选正确的重组子在FT293细胞中包装成病毒.以CsCl2方法纯化病毒,并进行滴度测定.将目的基因病毒感染bMSCs细胞后收集总RNA及蛋白,用PCR及Western blot方法检测目的基因表达水平.结果 ①成功扩增了大小为1883bp的大鼠deltex-1,并成功构建了大小为4.5kb的同源重组腺病毒穿梭载体,滴度为1.23×1011 IU/ml；②对培养的大鼠bMSCs进行流式检测,结果为CD90、CD44阳性表达,分别为99.57%和85.66%,而CD45达阴性,阳性率为0.35%；③荧光显微镜观察deltex-1转染效率为60%～ 70%,RT-PCR及Western blot检测结果显示转染后deltex-1表达明显增强,说明转染成功.结论 成功构建deltex-1基因腺病毒载体并能在bMSCs中高表达.
关键词： deltex-1基因 克隆 腺病毒载体 骨髓间充质干细胞 表达
