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shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响
目的 初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi- vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制.方法 采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株.利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法 检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况；采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法 分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响.结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P＜0.01)；细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%；细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组HUVECs增殖能力明显降低(P＜0.05)；Transwell侵袭实验:p115 shRNA组HUVECs较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力明显降低,24h穿过Transwell的细胞数分别为:(39±5)、(174±4)、(179±4),与对照组相比差别具有统计学意义(P＜0.05)；血管形成实验:p115 shRNA组HUVECs不能在Matrigel 胶上形成网状结构,空白对照组、shNC组成管指数分别为:(1 289±37)、(1 329 ±33),p115 shRNA组成管指数为:(422±41),与对照组相比差别具有统计学意义(P＜0.05).结论 p115基因沉默下调胃癌的VEGF-A表达及抑制血管生成；其分子机制可能与MIF通过PI3K/Akt信号通路途径调节胃癌血管形成有关.
