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Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达
目的 探讨Wnt蛋白的受体分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达、功能及其意义.方法 利用实时定量PCR、RT-PCR、Western blot和免疫荧光等技术分别检测Frizzled4 mRNA和蛋白在毛囊生长期(P1d、P3d、P8d)、退化期(P16d)和静止期(P21d)中的表达.免疫荧光技术检测Frizzled4在小鼠皮肤上皮细胞JB6 cl30-7b中的定位,MTT检测用抗Frizzled4抗体处理JB6 cl30-7b细胞后的增殖情况.结果 在毛囊生长期早期,Frizzled4 mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮肤中表达明显,膜表达于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外侧.在P3d,Frizzled4蛋白表达明显上调,主要表达于Bulge、毛囊外根鞘、内根鞘、precortex、部分毛球外侧.在生长中期(P8d),Frizzled4蛋白的表达强,集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及内根鞘.当毛囊进入退化期(P16d),Frizzled4 mRNA和蛋白的表达显著降低(P＜0.05),此时主要定位于Bugle.而在静止期,Frizzled4 mRNA和蛋白表达低(P＜0.05),只有少量Frizzled4阳性细胞出现在毛囊Bulge.免疫荧光技术检测Frizzled4蛋白同样也在JB6 cl30-7b细胞膜中表达.MTT结果显示与对照组相比,10μg/mL的抗Frizzled4抗体处理JB6cD0-7b细胞后光密度值明显降低(P＜0.05),而20 μg/mL的抗Frizzled4抗体处理后的光密度值降到低(P＜0.05).结论 Frizzled4在毛囊周期中的表达具有时空特异性.伴随着毛囊的生长,Frizzled4的mRNA和蛋白水平都呈现高表达,随着毛囊的退化而表达降低,直至静止期维持低表达水平.拮抗Frizzled4蛋白的作用促使细胞增殖受到明显抑制,提示Frizzled4的表达与毛囊细胞的增殖和分化相关.
