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TLR4通过下调ABCA1表达促进平滑肌源性泡沫细胞形成
目的 探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)促进平滑肌源性泡沫细胞的形成是否与三磷酸腺苷-结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter,ABCA1)表达异常相关.方法 组织贴块法培养原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs);细胞分为野生型(Wild type)空白对照组、Wild type氧化低密度脂蛋白(oxLDL)组、TLR4敲除(TLR4-/-)空白对照组和TLR4-/-oxLDL组;油红O染色观察VSMCs内脂质聚集,并用异丙醇萃取油红O测定光密度值;RT-qPCR、Western blot检测VSMCs中TLR4、ABCA1、IL-1β及TNF-α mRNA和蛋白表达水平;细胞免疫荧光染色鉴定原代VSMCs及观察核转录因子-kappa B(NF-κB)核转位.结果 ①Wild type oxLDL组中见细胞内大量脂滴形成,油红O光密度值为Wild type空白对照组的2.3倍(P＜0.01);TLR4-/-oxLDL组中只见少许脂质沉积于细胞内,油红O光密度值与TLR4-/-空白对照组相比无明显变化(P＞0.05).②Wild type oxLDL组ABCA1 mRNA及蛋白表达水平较Wild type空白对照组分别下降61％ (P ＜0.05),44％ (P ＜0.01);TLR4-/-oxLDL组ABCA1 mRNA及蛋白表达水平分别为TLR4--空白对照组的2.3倍(P＜0.05),1.7倍(P＜0.05).③Wild type oxLDL组VSMCs中NF-κB核转位明显增多,IL-1β和TNF-α mRNA表达较Wild type空白对照组分别升高3.9倍(P＜0.05),1.7倍(P＜0.05);TLR4-/-oxLDL组VSMCs中无明显NF-κB核转位,仅IL-1β mRNA表达较TLR4-/-空白对照组升高1.2倍(P＞0.05).结论 TLR4及其调节的炎性反应参与平滑肌源性泡沫细胞形成过程中ABCA1表达异常.
