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Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用研究
目的:探讨Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用.方法:培养人单核细胞株THP-1细胞,提取人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMDM).随机分为对照组和实验组,实验组用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/mL)复合干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ,20 ng/mL)干预(THP-1 18 h,PBMC、BMDM 24 h)构建巨噬细胞M1型极化模型.qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测2组M1型极化相关标志物,同时利用qRT-PCR和Western blot检测MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平.结果:与对照组相比,实验组在LPS+IFN-γ刺激后,qRT-PCR检测THP-1细胞M1型极化标志物:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)(t=-4.360,P=0.007)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)(t=-8.329,P=0.000)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)(t =-2.924,P=0.033)、CD14 (t=-2.858,P=0.035)、CD80(t=-3.433,P=0.019),PBMC细胞M1型极化标志物:TNF-α(t=-2.893,P=0.034)、IL-1β(t=-3.606,P=0.015)、IL-6(t=-2.895,P=0.034)、CD14(t=-2.645,P=0.046)、CD80(t=-3.648,P=0.015),BMDM细胞M1型极化标志物:TNF-α(t =-6.123,P=0.002)、IL-1β(t=-2.697,P=0.043)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)(t=-4.335,P=0.007)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)(t=-3.607,P=0.015)均明显增加,Western blot检测THP-1细胞M1型极化标志物:TNF-α (t=-3.827,P=0.031)、IL-1β(t=-4.189,P=0.025)、IL-6(t=-5.345,P=0.002)均明显增加,流式细胞术检测THP-1细胞M1型极化标志物HLA-DR(t=-3.270,P=0.017)、BMDM细胞M1型极化标志物F4/80+CD11c+(t=-3.833,P=0.009)均明显增加,提示M1型极化模型构建成功;在构建成功的M1型极化模型中,qRT-PCR检测THP-1细胞、PBMC细胞和BMDM细胞MEFV基因表达水平较对照组明显增加(t=-3.226,P=0.023;t=-2.989,P=0.030;t=-2.891,P=0.034),Western blot检测THP-1细胞Pyrin蛋白表达水平较对照组明显增加(t=-8.591,P=0.000).结论:巨噬细胞M1型极化中Pyrin表达增加,Pyrin可能与巨噬细胞M1型极化相关.
