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β-连环蛋白-绿色荧光蛋白文献资料
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Wnt/β-连环蛋白信号途径活性的分析系统的建立
目的:建立Wnt/β-连环蛋白信号途径功能活性的分析系统.方法:首先构建一个表达β-连环蛋白-绿色荧光蛋白的融合蛋白的载体,pCMV-bcGFP;再用之转染HEK293细胞,用G418和LiCl筛选出稳定表达该融合蛋白的细胞,克隆建株并鉴定.结果:成功获得稳定表达该融合蛋白的细胞株,即293-bc-GFP细胞株;在荧光显微镜下以及蛋白质印迹分析证实:所获得的293-bc-GFP细胞株表达该融合蛋白的基础水平极低;用Wnt1和LiCl处理后可以明显地使该融合蛋白在细胞内的水平升高.结论:上述结果提示该分析系统是以Wnt依赖的方式、受β-连环蛋白调节的.该分析系统可以用作一个功能报告系统,以鉴定肿瘤发生中导致β-连环蛋白信号途径失调的潜在的上游因子,也同样可以用于筛选那些特异抑制人类肿瘤中β-连环蛋白信号途径活性的潜在的抗癌分子.
