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EB病毒gp125蛋白的酵母表达及在鼻咽癌检测中的应用
[目的]采用毕赤酵母系统构建表达EB病毒gp125重组蛋白,并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用.[方法]以EBV DNA为模版,采用PCR法扩增gp125的编码基因BALF4 (2574 bp),与毕赤酵母表达载体pPIC9连接,转化酵母菌GS115,甲醇诱导重组蛋白表达.重组蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹法鉴定后,包被聚丙乙烯板,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群gp 125-IgA抗体.[结果]在毕赤酵母菌中高效地表达了分泌型的gp125重组蛋白,相对分子质量为110 000,免疫印迹证实目的蛋白有免疫原性,gp125蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者和健康对照的敏感度和特异度分别为78.0%和92.0%.[结论]采用毕赤酵母系统高效分泌表达了gp125重组蛋白,初步评估了gp125蛋白在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值.
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EB病毒BALF4基因的短肽合成及在鼻咽癌检测中的应用
目的:利用基因工程技术合成EB病毒抗原多肽gp125,并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法:利用因特网服务器预测EB病毒gp125蛋白的B细胞抗原表位,同时合成短肽,包被聚丙乙烯板,制备ELISA试剂,检测鼻咽癌患者和正常人群 gp125-IgA 抗体,对 B 细胞抗原表位在鼻咽癌诊断中的价值进行评估。结果:共合成6条短肽,其中2条特异性不高,其他短肽序列鼻咽癌组阳性检出率均高于健康组(P <0.001)。结论:成功合成EB病毒BALF4基因短肽并筛选出特异性高、免疫原性强的表位,为表达具有更高特异性和灵敏性的gp125蛋白作准备。