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补肾活血汤含药血清对骨髓间充质干细胞迁移及CXCR4表达的影响
[目的]探讨补肾活血汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移及趋化因子受体CXCR4表达的影响.[方法]以大鼠BMSCs为研究对象,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs.采用流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD34、CDllb;采用Transwell试验检测不同剂量组补肾活血汤含药血清对BMSCs迁移的影响;采用Westem blot法检测细胞CXCR4的蛋白表达水平.[结果]细胞表面抗原标记结果显示所得细胞为高纯度BMSCs.Transwell结果显示,补肾活血汤含药血清可显著增强大鼠BMSCs的迁移能力;Western blot结果显示,高、中、低剂量组补肾活血汤含药血清呈浓度依赖性上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达,与空白血清组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).[结论]补肾活血汤含药血清可促进BMSCs的体外迁移,并影响CXCR4蛋白的表达,其机制可能与上调CXCR4的表达、激活SDF-1/CXCR4轴有关.
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补肾活血汤提取物促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的研究
【目的】筛选出补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位。【方法】补肾活血汤（全方组）及其拆方（补肾组、活血组）分别用溶剂极性递增法提取得石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇以及水4个部位。骨髓间充质干细胞采用全骨髓贴壁法培养，传至第3代采用表面抗原鉴定，成骨、成脂分化鉴定。将上述补肾活血汤提取物按浓度梯度处理细胞24 h，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性，筛选出有效部位及其佳浓度。用补肾活血汤有效部位处理细胞， MTT法绘制细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期。【结果】与空白对照组比较，补肾活血汤及其拆方均具有不同程度维持细胞活性的作用。其中以补肾组乙酸乙酯部位、全方组乙酸乙酯部位及活血组乙酸乙酯部位为有效，且呈一定的药物浓度依赖性，100μg/mL为佳药物浓度，并未出现细胞毒性反应。细胞生长曲线显示：补肾活血汤有效部位处理细胞后，细胞增殖速度与数量较对照组更为明显，以补肾组有效，全方组次之。流式细胞仪检测细胞周期结果显示：补肾活血汤有效部位处理细胞后，处于增殖期细胞数量明显多于空白对照组，以补肾组有效，全方组次之。【结论】补肾活血汤促进骨髓间充质干细胞增殖的有效部位在补肾组乙酸乙酯部位，可使骨髓间充质干细胞处于增殖期细胞数目增多。
关键词： 补肾活血汤/分离和提纯 骨髓间充质干细胞/病理学 细胞周期 细胞培养 -
丹参酮ⅡA对骨髓间充质干细胞心肌方向分化间隙连接蛋白43表达的干预作用
[目的]研究丹参酮ⅡA对骨髓间充质干细胞(MSCs)心肌方向分化间隙连接蛋白43 (Cx43)表达的干预作用.[方法]体外培养大鼠MSCs,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting和免疫荧光技术检测不同组间MSCs Cx43表达.[结果]未分化的MSCs上Cx43有弱的表达；5-氮胞甙(5-aza)、正常心肌上清液以及缺氧心肌上清液诱导后Cx43的表达显著升高(P＜0.01)；丹参酮高剂量组(1.5×10-7 mol/L) Cx43的表达量显著增加(P＜0.05),丹参酮低剂量组(1.5×10-8mol/L)也显著升高(P＜0.01)；经缺氧心肌上清液和丹参酮共同干预后,Cx43表达较对照组均显著升高,但丹参酮低剂量组作用更加显著(P＜0.01)；缺氧心肌上清液和丹参酮低剂量组联合干预之后Cx43表达接近正常心肌细胞组(P＞0.05),各组间荧光强度的变化与RT-PCR和Western blotting的结果一致.[结论]不同浓度丹参酮ⅡA可上调MSCs上Cx43表达,但丹参酮ⅡA和缺氧心肌上清液联合诱导作用更强.
关键词： 骨髓间充质干细胞/病理学 丹参酮ⅡA/药理学 连接蛋白 基因表达调控 细胞培养 -
杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响
[目的]探讨杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响.[方法]分别取10日龄SD大鼠胫骨、股骨的骨髓,过滤离心后将所得BMSCs进行体外单层培养、扩增,采用DMEM培养基,37℃、体积分数5％ CO2条件培养.在细胞达到80％～90％融合时,使用2.5 g/L胰酶消化传代.将传代细胞分别置于空白血清培养液(对照组)、杜仲水提取物含药血清及杜仲醇提取物含药血清培养液进行培养,观察细胞在3种条件下的形态、贴壁生长、增殖、集落等情况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法绘制生长曲线,比较3种培养条件下达到100％融合的时间.[结果]杜仲水提取物组、杜仲醇提取物组对大鼠BMSCs增殖的影响显著高于空白血清对照组(P＜0.05),且杜仲醇提取物组作用优于杜仲水提取物组(P＜0.05).[结论]杜仲对大鼠BMSCs增殖具有一定促进作用.
关键词： 杜仲/药理学 骨髓间充质干细胞/病理学 细胞培养 细胞增殖 大鼠 -
三七总皂苷对骨髓间充质干细胞增殖和向心肌样细胞分化的影响
[目的]观察三七总皂苷(PNS)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和体外诱导其分化为心肌样细胞的作用.[方法]采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,以流式细胞仪检测细胞表面标志;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察PNS对MSCs增殖的影响;采用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化;采用相差显微镜、免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果鉴定心肌细胞.[结果]大鼠MSCs细胞表面抗原CD44阳性,CD34阴性;经PNS作用后MSCs增长速度比空白对照组明显加快,体外诱导后细胞形态发生变化,其细胞免疫组化鉴定呈结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnI)阳性;RT-PCR结果显示诱导后细胞转录肌球蛋白重链mRNA水平增加.[结论]PNS能促进大鼠MSCs体外增殖并可诱导MSCs分化为心肌样细胞,这为细胞移植治疗心肌梗死提供了实验依据.
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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与成骨鉴定
[目的] 研究大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs) 的分离纯化和在诱导条件下的成骨能力.[方法] 取SPF级SD大鼠6只,采用全骨髓贴壁培养法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,取传至第3代的MSCs进行细胞形态和免疫组化鉴定;应用含地塞米松、B-甘油磷酸钠和维生素C的诱导分化培养液诱导传代细胞向成骨细胞分化,检测碱性磷酸酶 (ALP) 的活性和细胞矿化作用进行成骨细胞鉴定.[结果] 全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs 在含体积分数为10%胎牛血清的低糖 DMEM(L-DMEM) 养液中生长性状相对稳定,增殖速度快;诱导条件下,细胞ALP活性明显增高,并出现了矿化结节.[结论] 建立了一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓 MSCs 的方法,成骨能力肯定,为中药蛋白质组学研究提供材料基础.
关键词： 骨髓间充质干细胞/病理学 细胞培养 体外的 组织工程 -
5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响
[目的]观察5-氮杂胞苷(5-Aza)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖和成肌分化的影响.[方法]无菌条件下取SD大鼠骨髓组织,采用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,传3代后的MSCs采用双标免疫组化法鉴定后,随机分为4组:浓度为5、10、15μmol/L的5-Aza组和空白对照组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度5-Aza对MSCs生长增殖的影响;以含5、10、20μmol/L5-Aza的培养基诱导培养MSCs 24 h后,改用完全培养基继续培养,采用免疫组织染色法鉴定5-Aza诱导分化3、7、14d后细胞肌分化相关蛋白肌凝蛋白(myosin)和结蛋白(desmin)的表达情况.[结果]双标免疫组化染色结果显示:所培养细胞同时表达Brdu和CD44、CD54,表达率达96%,鉴定结果表明所培养细胞为MSCs;5、10μmol/L5-Aza对MSCs增殖无显著影响(P>0.05),15μmol/L5-Aza可显著抑制MSCs生长(P<0.05);不同浓度5-Aza诱导培养MSCs后第3天,部分细胞出现desmin阳性表达,诱导后14 d,部分细胞表达myosin,以10μmol/L5-Aza组作用为佳.[结论]高浓度5-Aza可抑制MSCs体外增殖;适宜浓度的5-Aza可诱导MSCs向成肌细胞定向分化.
关键词： 骨髓间充质干细胞/病理学 5-氮杂胞苷/药理学 细胞培养 体外的 蛋白表达
