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3′端非编码区文献资料
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改造IFNα-2b基因3′端提高其在大肠杆菌中表达水平
目的:对人IFNα-2b基因的5′端进行改造,从翻译水平上调控IFNα-2b基因在大肠杆菌中的表达.方法:采用PCR方法,人工合成寡核苷酸引物,对人IFNα-2b基因进行了改造:去除3′端非编码区,并增加原核系统强终止密码子.将改造后的基因片段分别克隆入原核表达载体pBV321,在大肠杆菌中进行表达.对表达产物进行活性效价测定.结果:3′端删除非编码区,表达水平比删除前提高4倍.结论:IFNα-2b基因的3′端非编码区对其在原核系统的表达具有抑制作用,删除该区可提高表达水平.
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ERG 基因3′端非翻译区荧光素酶报告载体的构建及其活性
目的：构建人ERG基因3′端非翻译区（3′UTR）双荧光素酶报告载体，为研究ERG基因的转录后调控提供实验基础。方法以基因组DNA为模板PCR扩增ERG的3′UTR序列，并连接到psiCHECK2双荧光素酶报告载体的多克隆位点，测序鉴定psiCHECK2－ERG载体构建是否成功。通过生物信息学预测ERG 3′UTR具有miR－145－5p的结合靶点。通过共转染miR－145－5p模拟物和psiCHECK2－ERG载体，检测荧光素酶的活性，以共转染miR－145－5p模拟物对照和psiCHECK2－ERG载体作为参照。结果构建了含有ERG 3′UTR序列的双荧光素酶报告系统，酶切电泳和基因测序证实序列与目标一致。 miR－145－5p模拟物和报告质粒共转染者荧光素酶活性明显下降（28.39％，P＜0.05）。结论含有ERG 3′UTR的双荧光素酶报告载体构建成功。初步鉴定miR－145－5p作用ERG基因3′UTR，对ERG发挥转录后水平调控作用。
