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细胞外信号调节激酶1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制转化生长因子-β1诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达中的作用
目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白中的作用,及新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)对该作用的影响.方法 体外培养肺成纤维细胞随机分为4组:对照组(0.4％血清)、TGF-β1组(5μg/L)、阴性转染组(TGF-β1+阴性对照siRNA)和Prx-1 siRNA转染组(TGF-β1+Prx-1 siRNA).采用脂质体转染法转染siRNA,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后Prx-1 mRNA表达;Western blot检测Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ERK1/2及Prx-1表达;2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平.结果 Prx-1 siRNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 mRNA表达明显降低,大抑制率为92％.与对照组比较,TGF-β1组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显提高.与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1转染组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、p-ERK1/2水平进一步提高,而Prx-1蛋白的表达被抑制.结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并促进ERK1/2通路的激活,导致Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成增加,而Prx-1 siRNA可通过提高ROS水平进一步促进TGF-β1该作用.
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ERK1/2通路在Peroxiredoxin－1抑制TGF－β1诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用
目的：探讨细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）在新型过氧化物酶Peroxiredoxin－1（Prx－1）抑制转化生长因子－β1（ TGF－β1）诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用。方法体外培养肺成纤维细胞，随机分为对照组、TGF－β1组、阴性转染组、Prx－1 siRNA转染组。各组细胞用0.4％血清培养12 h使其同步化。 TGF－β1组、阴性转染组和Prx－1 siRNA转染组均添加5μg／L TGF－β1刺激24 h，阴性转染组和Prx－1 siRNA转染组分别利用脂质体Lipo2000将干扰siRNA和Prx－1 siRNA转染到肺成纤维细胞，培养48 h。 Real－time PCR检测转染后Prx－1 mRNA表达；MTT检测细胞增殖、Western blot检测ERK1／2及Prx－1表达、2，7－二氯荧光素二乙酸（ DCFH－DA）检测活性氧（ ROS）水平。结果 Prx－1 siRNA转染肺成纤维细胞后，Prx－1 mRNA表达明显降低，大抑制率为92％。与对照组比较，TGF－β1组的细胞增殖、ROS、磷酸化ERK1／2（p－ERK1／2）及Prx－1蛋白的表达水平均明显增加。与TGF－β1组比较，阴性转染组中的上述观察指标无明显变化，但Prx－1 siRNA转染组的细胞增殖、ROS、p－ERK1／2的水平明显上升，而Prx－1蛋白的表达被抑制。结论 TGF－β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS，并由此促进ERK1／2的激活，终导致细胞增殖，而Prx－1 siRNA则可通过增加ROS水平进一步促进TGF－β1的作用。
关键词： Prx-1 活性氧 细胞外信号调节激酶1/2 转化生长因子-β1 细胞增殖
