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简便快速的PCR产物回收方法
目的分析比较几种PCR产物回收方法的回收效果.方法针对PCR DNA的回收效果及回收特点,采用内皮素(Endothelin)基因PCR反应产物,分别利用本室建立的二种新方法--速冻-快速离心法、凝胶浸泡法和传统方法--玻璃珠试剂盒回收法对PCR产物DNA进行回收,用琼脂糖凝胶电泳鉴定3种方法回收PCR产物的效果.结果发现两种新方法回收DNA带的亮度强,与传统方法相比,差异无显著性(P＞0.10).结论说明速冻-快速离心法与凝胶浸泡法不仅具有玻璃珠试剂盒回收PCR 产物的效果,而且经济、方便、可靠,是两种可行的PCR产物回收方法.
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PCR-PAGE切胶回收-PCR测序法分析DNA缺失或插入突变
目的 探索一种快速确定缺失或插入突变杂合子DNA序列的简便方法. 方法 采用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrphoresis, PAGE)-切胶回收-二次PCR-测序的方法,分析P基因1920del30 bp和insAACA杂合突变的突变等位基因序列.结果 获得了准确的突变等位基因序列.结论 PCR-PAGE电泳-切胶回收-二次PCR-测序方法可准确鉴定缺失/插入突变杂合子个体突变等位基因DNA序列,在多方面优于克隆测序.
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从琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的一种简便方法
目的:构建一种简便装置,以高效回收琼脂糖电泳凝胶中的DNA.方法:利用1.5ml微量离心管、1ml移液枪头、尼龙网膜和透析膜,做成一个巧妙且简单的DNA回收装置.以分子量参照物λDNA/EcoR I+HindⅢ为验证样品,对其部分条带进行回收.用凝胶电泳和DNA连接实验鉴定回收产品的质量.结果:在电压降为3V/cm、时间为0.5 h的电洗脱条件下,分子量标记中564bp条带的终回收率高达80%,21 227bp条带的回收率约为30%.DNA回收产品质量优良.结论:从琼脂糖电泳凝胶中回收目的DNA,这是一种简便、快速、高效且廉价的方法.
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从高浓度琼脂糖凝胶中纯化DNA的方法学探讨
目的 建立从高浓度琼脂糖凝胶中有效、快速回收DNA片段的方法.方法 从3％的琼脂糖凝胶中切出含有目的DNA片段的等体积胶块,设置实验组和对照组.实验组放入-20℃冷冻30min,对照组4℃放置,纯化各组DNA,PCR扩增后电泳.结果 实验组溶胶时间明显短于对照组,PCR扩增后电泳结果显示实验组DNA条带明亮且整齐.结论 高浓度琼脂糖凝胶冷冻后有利于快速、高效回收DNA片段,且方法简单,回收率高.
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从高浓度琼脂糖凝胶中纯化DNA的方法学探讨
目的 建立从高浓度琼脂糖凝胶中有效、快速回收DNA片段的方法.方法 从3％的琼脂糖凝胶中切出含有目的DNA片段的等体积胶块,设置实验组和对照组.实验组放入-20℃冷冻30min,对照组4℃放置,纯化各组DNA,PCR扩增后电泳.结果 实验组溶胶时间明显短于对照组,PCR扩增后电泳结果显示实验组DNA条带明亮且整齐.结论 高浓度琼脂糖凝胶冷冻后有利于快速、高效回收DNA片段,且方法简单,回收率高.
