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葡萄糖苷 酶Ⅰ文献资料
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葡萄糖苷酶Ⅰ特异性siRNA-EGFP真核表达载体的构建及表达
目的:构建葡萄糖苷酶Ⅰ(glucosidaseⅠ, GluⅠ)特异性siRNA真核表达载体.方法:根据siRNA靶序列选取原则,设计并合成针对鼠葡萄糖苷酶ⅠcDNA的寡聚DNA,退火并连接至载体pSilencer1.0-U6,再将U6启动子及下游插入片断一起切下,克隆至真核表达载体pEGFP-C1,通过限制性酶切和测序对重组表达载体进行鉴定,后将该质粒转染至HeLa细胞,共聚焦荧光显微镜观察其表达.结果:①限制性酶切和测序结果表明成功构建了带有EGFP基因的鼠GluⅠ特异性的siRNA真核表达载体pC-1U6glu; ②共聚焦荧光显微镜观察结果表明p-C1U6glu成功转染至HeLa细胞.结论:pC-1U6glu的成功构建及表达为进一步利用siRNA研究葡萄糖苷酶Ⅰ的功能和治疗肿瘤奠定基础.
