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牵张力与雌激素对兔鼻软骨细胞增殖效应调节的初步研究
目的:探讨牵张力与雌激素对兔鼻软骨细胞增殖效应的影响.方法:1)采用MTT四唑盐比色法,检测不同剂量的17～β雌二醇(E2)(10-12～10-6 mol/L)对第4代新生及6周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞增殖活性的影响.2)将第4代新生及6周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞在细胞膜式牵张力施加装置上培养,检测不同浓度17-β雌二醇(10-10-10-8 mol/L)及5 kPa牵张力联合应用0、12 h后,对兔鼻软骨细胞增殖活性(PI值)的影响.结果:(1)10-10～10-8 mol/L 17-β雌二醇体外培养新西兰白兔兔鼻软骨细胞生长具有刺激作用,且呈剂量依赖性,大效应浓度为10-8 mol/L ,进一步增加E2浓度则刺激作用减弱.10-6 mol/L 具有明显抑制性.(2) 5 kPa牵张力联合17-β雌二醇培养较17-β雌二醇的单独作用具有更强的促兔鼻软骨细胞增殖作用.结论:牵张力与雌激素可以调节兔鼻软骨细胞增殖活性.
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牵张力对体外培养兔鼻软骨细胞影响的实验研究
目的:探讨牵张力对体外培养的不同年龄兔鼻软骨细胞增殖活性的影响及牵张力大小与兔鼻软骨细胞增殖活性改变的量效关系.方法:将第4代体外培养的新生及6周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞置于细胞膜式牵张力施加装置上培养,流式细胞仪检测不同的牵张力(5 kPa、10 kPa)在0～12 h内对兔鼻软骨细胞增殖活性的影响.结果:0～10 h内5 kPa牵张力组软骨细胞增殖指数随着牵张力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于10 h处;0～8 h内10 kPa牵张力组软骨细胞增殖指数随着牵张力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于8 h处;5 kPa较10 kPa牵张力对体外培养兔鼻软骨细胞具有更大的促增殖作用;牵张力对体外培养的新生兔兔鼻软骨细胞具有更大的促增殖作用.结论:牵张力可促进体外培养的新生及六周龄新西兰白兔兔鼻软骨细胞增殖活性,提示我们鼻软骨牵张方法不仅适用于临床矫治新生儿唇腭裂伴发鼻畸形,而且有可能用于矫治1岁左右婴儿甚至更大年龄患儿的唇腭裂伴发鼻畸形.
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培养状态下兔鼻软骨细胞生物学特性的研究
目的:探讨体外培养的正常兔鼻软骨细胞分离培养方法及生物学特性.方法:体外分离培养兔鼻软骨细胞,观察原代及传代培养的细胞形态学变化;测定细胞数量的变化及其生长曲线,观察细胞的增殖;借助特殊染色,免疫组织化学的方法了解葡萄糖胺聚糖,Ⅱ型胶原的合成情况;测定冷冻复苏后的细胞存活率.结果:原代体外培养的新西兰白兔兔鼻软骨细胞初始接种时为圆形,细胞贴壁后逐渐变为多角形;组织学,免疫组化显示细胞培养4代以内可以保持表型的稳定;冷冻复苏存活率为93%.结论:体外培养的兔鼻软骨细胞表型能保持4代稳定,具有正常的生长增殖能力,并可经深低温冷冻长期保存.
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小鼠鼻软骨细胞的培养
目的研究小鼠鼻软骨细胞体外培养方法及形态特征.方法取Balb/c小鼠子鼠的鼻中隔软骨,随机分为4组后分别消化4 h,8 h,12 h及16 h,观察体外培养软骨细胞的生长状况,并用Ⅱ型胶原抗体进行细胞来源鉴定.结果经Ⅱ型胶原酶孵育消化4 h的组织,细胞量少,生长缓慢,无法进行正常传代.而消化8 h的软骨组织、细胞于l d后即开始贴壁、伸展,9 d后第一次传代,传代细胞生长稳定,形态多样,Ⅱ型胶原抗体染色阳性.消化2 h及16 h的细胞几乎不贴壁.结论采用酶消化法可获得体外培养的小鼠鼻软骨细胞,消化时间以8 h为佳.
