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大鼠下颌下腺细胞培养及其生物学特性研究
目的:体外培养大鼠下颌下腺细胞,并对其生物学特性进行研究,为涎腺疾病的探索提供体外模型.方法:无菌条件下取7d龄Wistar大鼠双侧下颌下腺,仔细分离脂肪、包膜、神经和血管,采用组织块培养法进行培养.运用酶消化法和差速贴壁法纯化细胞;免疫组化SP法检测Cytokeratin-8 (CK-8)抗体和α-Amylase抗体的表达;PAS染色法检测细胞糖原分泌;扫描电镜(scanning electronic microscopy,SEM)观察细胞的形态学特征.结果:组织块培养法可成功获得下颌下腺细胞,免疫组化染色可见大部分细胞胞质为棕黄色,提示CK-8抗体表达阳性,α-Amylase抗体表达阳性;PAS染色可见胞质呈紫红色;SEM可见细胞伸出长短不一的伪足,胞核着色深,有些细胞可见分泌颗粒.结论:组织块培养法可以成功培养大鼠下颌下腺细胞,并且操作简便.
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下颌下腺细胞裂解液诱导骨髓间充质干细胞向涎腺细胞转分化的实验研究
目的:用下颌下腺细胞裂解液体外诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),观察BM-MSCs能否表达涎腺细胞的特异性分泌蛋白-α-淀粉酶.方法:分离并培养新生SD大鼠的下颌下腺细胞(submandubular gland cells,SMGCs),测定各代腺泡细胞分泌α-淀粉酶的量,取分泌量显著一代制成下颌下腺细胞裂解液;自新生SD大鼠股骨、胫骨中分离出BM-MSCs,培养至第3代时用含下颌下腺细胞裂解液的培养基培养1周,细胞免疫组织化学法鉴定诱导后的BM-MSCSα-淀粉酶的表达.结果:细胞免疫组化可检测到所培养的下颌下腺细胞中含α-淀粉酶,淀粉酶试剂盒测定结果显示,P2、P3代SMGCs分泌的α-淀粉酶较其它各代明显(P<0.01).经下颌下腺细胞裂解液诱导BM-MSCs后,可见下颌下腺腺泡样细胞,免疫组化显示其表达淀粉酶,而对照组未表达淀粉酶.结论:下颌下腺细胞裂解液能体外模拟下颌下腺细胞微环境诱导BM-MSCs转分化为具有分泌α-淀粉酶蛋白能力的下颌下腺腺泡样细胞,为解决涎腺组织工程中种子细胞的来源提供一条新途径.
