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脂肪源性于细胞文献资料
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慢病毒载体介导的低氧诱导因子-1α在脂肪源性干细胞中的表达
目的 构建携带有增强绿色荧光蛋白(EGFP)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的重组慢病毒载体,并感染人脂肪源性干细胞(hADSCs).方法 重组慢病毒载体Lenti-hHIF-1α-EGFP转染293T细胞,进行病毒包装并测定病毒滴度.按照MOI=20将Lenti-hHIF-1α-EGFP转染hADSCs,流式细胞仪分选EGFP标记的细胞.对转染后的hADSCs进行多向分化能力鉴定,并检测hADSCs内hHIF-1α的表达.结果病毒滴度为5×107 pfu/ml.Lenti-hHIF-1α-EGFP转染hADSCs后第3天,荧光镜下观察转染效率70％,经流式细胞仪分选后,98％以上的细胞均有EGFP的表达.转染后的hADSCs茜素红染色及油红O染色阳性,表明hADSCs仍具有多向分化的潜能.hADSCs可以高表达HIF-1α.结论成功构建带有报告基因EGFP和目的基因hHIF-1α的慢病毒表达系统,并以慢病毒为载体将hHIF-lα整合到hADSCs中实现其高效表达.
