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慢病毒介导的KLF5转染对RKO细胞增殖和侵袭的影响
目的 构建Kruppel-like factor 5(KLF5)慢病毒载体并转染人结肠癌RKO细胞中,观察KLF5对结肠癌细胞RKO生物学行为的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人小肠黏膜中扩增出KLF5基因编码区1374 bp的片段,随后将扩增KLF5片段插入慢病毒转移载体pCDH-CMV-KLF5 -Efl -copGFP,构建KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1-copGFP.在脂质体介导下将构建成功的重组慢病毒转染人胚肾细胞株(293T)包装生产慢病毒,测定病毒滴度,感染结肠癌RKO细胞.RT-PCR和Western blot法分别检测KLF5 mRNA和蛋白的表达.随后将实验分为空白对照组和实验转染组进行实验.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染前后RKO细胞增殖的变化以及Transwell实验检测转染前后细胞增殖和侵袭能力的变化.结果 成功合成KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1 -copGFP并转染入RKO细胞中.RT-PCR以及Western blot结果提示与对照组比较,KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1 -copGFP成功在RKO细胞中得到合成和表达.同时高表达的KLF5可以明显抑制RKO细胞的增殖(P＜0.05).另外KLF5可以明显抑制RKO细胞的迁移能力(50.26±2.17比25.12 ±2.27,t=17.66,P＜0.05)和侵袭能力(45.48±1.53比22.13 ±2.25,t=3.37,P＜0.05).结论 KLF5可以有效抑制结肠癌RKO细胞的增殖、迁移和侵袭.
关键词： 结肠癌 慢病毒 Kruppel-like factor 5 -
KLF5在脱氧胆酸诱导胃黏膜肠上皮化生中的作用
目的 探究Krüppel样因子5(KLF5)是否参与脱氧胆酸(DCA)诱导的胃黏膜肠上皮化生及其可能的作用机制.方法 收集正常胃黏膜和肠上皮化生组织,用不同浓度DCA(100、200和500μmol/L)处理胃黏膜上皮GES-1细胞,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测KLF5和Wnt3a的表达.将GES-1细胞分为空白对照组、DCA组、阴性对照组及KLF5沉默组,分别用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot和qRT-PCR检测TFF2、VIL1和CDX2的表达.用氯化锂LiCl(Wnt通路激活剂)处理si-KLF5转染的细胞,检测各组细胞中Wnt3a、β-catenin和CDX2的表达.结果 与正常胃黏膜相比,肠上皮化生组织中KLF5和Wnt3a的表达上升.随着DCA浓度增加,GES-1细胞中KLF5和Wnt3a的表达逐渐升高.500μmol/L DCA处理GES-1细胞后,细胞的增殖能力提高,凋亡率降低,TFF2、VIL1和CDX2的表达升高,而si-KLF5转染使细胞增殖能力降低,凋亡率升高,TFF2、VIL1和CDX2的表达降低,抑制DCA对GES-1细胞的作用.另外,LiCl能减弱DCA处理后si-KLF5转染对细胞中Wnt3a、β-catenin和CDX2表达的影响.结论 KLF5可能通过激活Wnt通路,促进DCA诱导的胃黏膜肠上皮化生.
