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短发夹状双链核糖核酸干扰文献资料
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转录因子c-Ets-2 shRNA构建和对细胞促凝活性的影响
目的:构建转录因子c-Ets-2的短发夹状双链RNA (shRNA)干扰质粒,验证其对转录因子c-Ets-2表达的干扰效果,并研究转录因子c-Ets-2对人凝血酶原酶(hfgl2)基因表达及细胞促凝活性的影响.方法:采用基因克隆方法构建c-Ets-2 shRNA干扰质粒,并使用酶切鉴定方法和测序进行证实.使用实时荧光定量逆转录PCR (qRTPCR)和Western blot方法对干扰效果进行验证.并进一步采用该质粒与HBV病毒蛋白表达质粒共转染单核细胞系THP-1,研究c-Ets-2 shRNA干扰质粒对hfgl2基因转录表达的影响和对细胞促凝活性的作用.结果:c-Ets-2 shRNA干扰质粒构建成功,可下调转录因子c-Ets-2 mRNA和蛋白水平的表达.当与HBx病毒蛋白表达质粒共转染时,该干扰质粒可抑制hfgl2基因的转录,降低细胞的促凝活性.结论:转录因子c-Ets-2与凝血级联途径有关,参与了重型肝炎和肝细胞癌等疾病的发生发展.
关键词： 基因调控 转录因子c-Ets-2 短发夹状双链核糖核酸干扰 促凝活性
