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T 淋巴细胞相关抗原-4文献资料
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稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原CTLA-4的293T细胞株的建立
目的:构建稳定表达细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4, CTLA-4)的293T 细胞株。方法首先从人外周血获取 PBMC 加以 T 细胞活化; PCR 扩增 CTLA-4转录本,连接pUCm-T 质粒引入 HindⅢ和 EcoRⅠ双酶切位点后转入真核细胞表达质粒 pcDNA3.1;重组质粒 pcDNA3.1-CTLA-4经脂质体转染293T 细胞,以抗生素 G418筛选表达 CTLA-4的293T 细胞;定量 PCR、免疫荧光分别检测293T 细胞 CTLA-4表达与细胞定位。结果血样来源 T 细胞经活化后表达 CTLA-4转录本。 HindⅢ和EcoRⅠ双酶切证实重组质粒内 CTLA-4插入序列正确; RT-PCR 及免疫荧光检测证实293T 细胞能够稳定表达目的蛋白 CTLA-4,并定位于细胞膜表面。结论成功构建的 pcDNA3.1-CTLA-4重组真核表达载体,在293T 细胞膜表面实现了稳定表达,为进行相关生物学理论与应用研究打下基础。
关键词: T 淋巴细胞相关抗原-4 293T 细胞 基因克隆 真核表达