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来氟米特活性代谢物A771726抑制角膜新生血管的实验研究
目的 探讨来氟米特活性代谢物丙二酸次氮酰胺(A771726)对角膜新生血管的抑制作用及机制. 方法 (1)碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型,40只SD大鼠随机分成A、B、C及D组,每组10只大鼠(10只眼).空白对照组(A组)生理盐水滴眼,B、C、D组伤后分别滴用0.5%、1.0%及2.0%的A771726滴眼液,均每日4次,共28 d.每日裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管的生长情况,测量新生血管面积.(2)不同浓度A771726与体外培养的人脐静脉内皮细胞(ECV-304)共同孵育,以四唑盐比色法(MTT法)检测细胞的增生活性,激光共聚焦显微镜检测免疫荧光染色增生细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 (1)C、D组大鼠角膜新生血管面积均显著小于空白对照A组(P＜0.01),而B组大鼠角膜新生血管面积与A组差异无统计学意义(P＞0.05).(2)40、80、160、320 μmol/L A771726与人脐静脉内皮细胞共同孵育36 h可抑制细胞增生,随浓度增加抑制作用增强,免疫荧光染色显示细胞核PCNA的表达有降低.结论 A771726能通过抑制血管内皮细胞增生阻止角膜新生血管生成.
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丙二酸次氮酰胺对刀豆蛋白刺激的胶原性关节炎模型大鼠CD4+CD25+调节性T淋巴细胞体外分化的影响
目的:研究来氟米特活性代谢物丙二酸次氮酰胺(A771726)对刀豆蛋白(ConA)刺激的胶原性关节炎(CIA)模型大鼠CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Tregs)体外分化的影响及其治疗类风湿性关节炎的作用机制.方法:取大鼠分为正常对照组和CIA模型组,建模后制备脾淋巴细胞悬液,再分为正常组、模型组和A771726低、中、高剂量(0.1、1、10 μmol· L-1)组,各组加入ConA刺激和相应药物培养液培养48 h后,以MTT法检测各组脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测各组CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例；反转录-聚合酶链式反应检测各组CD4+CD25+Tregs特异性标志物Foxp3和转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达情况；酶联免疫吸附测定法检测各组TGF-β浓度.结果:与正常组比较,模型组脾淋巴细胞增殖明显升高(P＜0.01),CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例、Foxp3和TGF-β mRNA表达、TGF-β浓度均明显降低(P＜0.05)；与模型组比较,A771726 3个剂量组脾淋巴细胞增殖明显降低(P＜0.05或P＜0.01),A771726高剂量组CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例明显升高,A771726中、高剂量组Foxp3和TGF-β mRNA表达、TGF-β浓度均明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:A771726可抑制CIA模型大鼠脾淋巴细胞增殖,诱导CD4+CD25+Tregs的分化,其机制可能与上调TGF-β的表达和分泌有关.
