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Ngn2基因转染对小鼠体外培养三维视杯结构视网膜神经元分化的调控作用
目的 探讨Ngn2基因对小鼠体外培养三维视杯结构视网膜神经元分化的调控作用. 方法 采用小鼠诱导多能干细胞(iPSC)在特定条件下体外培养获取视泡结构(OV),OV培养过程中通过慢病毒介导Ngn2基因多次转染OV,并在OV发育成熟后进行诱导,促进OV内细胞向视网膜神经细胞的特异性分化.以绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为对照,免疫荧光法检测OV内视网膜神经细胞的分化情况,采用逆转录PCR和Western blot法定量检测OV内视网膜神经细胞特异性蛋白Pax6、Islet1和Brn3b基因和蛋白的表达情况.结果 成功培养出小鼠iPSC来源的OV.慢病毒介导下经Ngn2基因诱导的OV组织内部神经细胞的分化数量增加.逆转录PCR和Western blot法定量检测结果显示,Ngn2转染组OV内视网膜神经细胞特异性蛋白Pax6、Islet1和Brn3b在基因及蛋白水平的相对表达量均明显高于EGFP转染组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 Ngn2基因转染可有效提高OV内视网膜神经细胞的分化数量,使体外培养的OV发育更为成熟,形成更为完善的视网膜细胞神经环路.
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Ngn2促进皮肤干细胞神经分化的电生理学及其机制研究
目的:探讨Ngn2基因转染皮肤干细胞(SKPs)促进神经分化的电生理学机制及可能的机制.方法:体外培养SD大鼠乳鼠SKPs并纯化、鉴定.构建包装含Ngn2基因并用绿色荧光蛋白(GFP)标记的病毒载体.将SKPs分3组:Ngn2组为包装有Ngn2基因的慢病毒转染的SKps,空病毒组为未包装任何基因的慢病毒转染的SKps,空白对照组为未经慢病毒转染的SKps,各组6皿.诱导液诱导14d,全细胞膜片钳技术检测各组SKPs的电生理活动;Wetem Blot检测各组SKps钠离子通道相关蛋白Nav1.3及Notch信号通路相关蛋白Hes1和Dll1表达水平.结果:诱导14d后,Ngn2组SKPs出现电压依赖性钠离子通道电流,而其他2组SKPs均未引出钠离子通道电流;Ngn2组SKPs的Nav1.3蛋白表达水平高于其他2组(P＜0.01);Ngn2组SKPs D111蛋白的表达水平高于其他2组,Hes1蛋白的表达水平低于其他2组(P＜0.01).结论:Ngn2基因促使SKPs表达电压门控性钠离子通道,其机制可能与Notch信号通路有关.
