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CD40小干扰 RNA 对自身免疫性心肌炎大鼠血白细胞介素-21与白细胞介素-35表达的影响
目的：探讨 CD40小干扰 RNA（siRNA）对实验性自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠外周血白细胞介素-21（IL-21）与白细胞介素-35（IL-35）表达的影响及意义。方法将6～8周20只雄性 Lewis 大鼠采用随机数字表法分为正常组、EAM组、CD40 siRNA 组及 siRNA 组，每组5只。实验第0天及第7天，正常组大鼠双后肢足垫区皮下注射 PBS 缓冲液，其余3组双后肢足垫区皮下注射猪心肌球蛋白，建立 EAM大鼠模型。第7天 CD40 siRNA 组及 siRNA 组大鼠经尾静脉分别注射 CD40 siRNA 及 siRNA 慢病毒表达载体。第21天，行超声心动图检查后处死大鼠。光镜下观察心肌组织病理变化并计算心肌组织病理积分。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠外周血 IL-21与 IL-35水平。结果1．除正常组大鼠，余3组大鼠 EAM发病率均为100％，无一例死亡。2．CD40 siRNA 组大鼠心脏质量／体质量比值明显低于 EAM组，差异有统计学意义（3．13±0．21比3．80±0．29，F ＝0.332，P ＜0．05）；其心肌组织病理积分亦明显低于 EAM组，差异有统计学意义（2．22±0．43比3．32±0．51， F ＝0．456，P ＜0．05）。3．超声心动图检测显示，EAM组有1例大鼠探及大量心包积液，CD40 siRNA 组大鼠均未探及心包积液。EAM组、CD40 siRNA 组及 siRNA 组大鼠室间隔和左心室后壁均增厚，心腔缩小，室壁运动减低。CD40 siRNA 组左心室短轴缩短率较 EAM组明显升高，差异有统计学意义[（63．34±11．06）％比（38．56±6.98）％，F ＝16．080，P ＜0．05]。4．CD40 siRNA 组大鼠外周血 IL-21水平明显低于 EAM组，差异有统计学意义[（141．19±17．46）ng／L 比（157．81±17．58）ng／L，F ＝57．008，P ＜0．05]；而其 IL-35水平明显高于 EAM组，差异有统计学意义[（195．96±18．26）ng／L 比（174．78±13．91）ng／L，F ＝31．727，P ＜0．05]。5．EAM组大鼠外周血 IL-21水平与心肌组织病理积分呈正相关（r ＝0．69，P ＜0．05），而其 IL-35水平与心肌组织病理积分呈负相关（r ＝－0．64，P ＜0．05）。结论CD40 siRNA 可减轻 EAM大鼠的心肌炎症，降低心肌损伤程度。IL-21与IL-35水平变化可在一定程度上反映心肌损伤程度。CD40 siRNA 对 EAM大鼠的治疗作用可能与下调 IL-21、上调 IL-35的表达有关。
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小干扰 RNA 沉默 CD40基因对自身免疫性心肌炎大鼠 Th1/Th2与 Th17/Treg 平衡的影响
目的：通过建立自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠模型，探讨小干扰 RNA（siRNA）沉默 CD40基因后对 EAM 大鼠外周血 Th1/ Th2与 Th17/ Treg 平衡的影响。方法采用随机数字表法将 Lewis 大鼠分为正常对照组、EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组。第0天和第7天，EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠注射猪心肌肌球蛋白建立 EAM 模型。第7天，CD40 siRNA 治疗组大鼠予 CD40 siRNA 治疗。观察各组大鼠基本情况，于第21天记录各组大鼠心电图及超声心动图后处死大鼠，观察心肌组织病理变化并计算病理学积分，应用 ELISA 法检测大鼠外周血干扰素（IFN）-γ、IL-4、IL-17及转化生长因子（TGF）-β水平。结果1. EAM组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠 EAM 的总体发病率为100%，且在第0天至第21天均无死亡。2.正常对照组与 CD40 siRNA 治疗组大鼠心电图均正常，EAM 组与 siRNA 组大鼠仅2例出现期前收缩。3. EAM组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠超声心动图均异常，表现为左心室扩大、左心室壁肥厚、心肌动度减低、心功能明显降低、心包积液。CD40 siRNA 治疗组大鼠左心室短轴收缩率（LVFS）和左心室射血分数（LVEF）显著高于 EAM 组[（46.70±8.25）%比（34.28±11.81）%，（80.92±11.76）%比（64.03±12.60）%]，差异均有统计学意义（F ＝0.652、0.234，P 均﹤0.05）。4. EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠心肌组织病理检查显示心肌纤维断裂、心肌细胞坏死及炎性细胞浸润。CD40 siRNA 治疗组心肌组织病理学积分明显低于EAM 组（2.10±1.07比3.40±0.72），差异有统计学意义（F ＝1.290，P ﹤0.05）。5.与正常对照组比较，EAM组大鼠外周血 IFN-γ、IL-4、IL-17及 TGF-β水平均显著升高[（1245.55±244.56）ng/ L 比（501.53±18.93） ng/ L，（78.03±10.47）ng/ L 比（30.77±1.74）ng/ L，（80.82±13.33）ng/ L 比（27.98±3.01）ng/ L，（156.27±12.11）ng/ L 比（4.33±0.79）ng/ L]，差异均有统计学意义（ t ＝7.408、10.764、9.250、30.608，P 均﹤0.05）， CD40 siRNA 治疗组大鼠外周血 IFN-γ与 IL-17水平较 EAM 组显著降低[（940.62±128.40） ng/ L 比（1245.55±244.56）ng/ L，（60.42±12.40）ng/ L 比（80.82±13.33）ng/ L]，差异均有统计学意义（t ＝2.704、2.745，P 均﹤0.05），IL-4与 TGF-β水平显著升高[（97.91±13.62）ng/ L 比（78.03±10.47）ng/ L，（178.84±12.10）ng/ L 比（156.27±12.11）ng/ L]，差异均有统计学意义（t ＝2.835、3.229，P 均﹤0.05）。结论 CD40 siRNA 可明显减轻 EAM 大鼠心肌炎症，改善心功能，其机制可能与其降低 Th1与 Th17相关细胞因子水平，上调 Th2与 Treg 相关细胞因子的水平，从而纠正 Th1/ Th2与 Th17/ Treg 失衡有关。
