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鞘内注射miR-212反义锁核酸对骨癌小鼠痛行为的影响
目的 研究骨癌痛发展和维持过程中小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律及连续鞘内注射miR-212反义锁核酸LNA-anti-miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 本实验分为两个部分:(一)骨癌痛小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律:C3H/HeJ雄性小鼠36只,随机分为假手术组(sham组,n=18)和肿瘤组(T组,n=18).sham组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的α-MEM,T组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射纤维肉瘤细胞NCTC 2472,建立骨癌痛模型.在术前1d,术后4d、7d、10 d、14 d、21 d,sham组和T组各随机取三只小鼠处死,取脊髓腰膨大标本,用Real-time PCR的方法检测脊髓水平miR-212的表达情况.(二)连续鞘内注射LNA-anti-miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响:C3H/HeJ雄性小鼠24只,随机分为四组:L组(鞘内注射LNA-anti-miR-212,n=6)、L’组(鞘内注射LNA'-negative control,n=6)、C组(鞘内注射溶媒无核酸酶水,n=6)和S组(假手术处理,n=6).L组、L’组和C组小鼠在右侧股骨远端注射纤维肉瘤细胞NCTC 2472,S组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的α-MEM.所有小鼠于术前1d、术后4d、7d、10 d、14 d测小鼠痛行为指标,包括自发抬足次数和机械缩足阈值(PWMT),术后14 d,L组、L’组、C组小鼠分别鞘内注射LNA-anti-miR-212 12 pmol/5μl、LNA '-negative control 12 pmol/5μl和无核酸酶水5μl,连续鞘内注射7d,1次/d,每天测小鼠痛行为指标,至术后第21天.结果 miR-212的表达变化表现为:与基础值相比,sham组和T组小鼠在术后第4天,脊髓水平miR-212明显升高(P＜0.05)；与基础值和sham组相比,T组小鼠脊髓水平miR-212在术后7d、10 d、14 d、21 d均明显升高(P＜0.05).连续鞘内注射LNA-anti-miR-212改善骨癌痛小鼠痛行为:术后19 d至21 d,与L’组和C组相比,L组小鼠PWMT[19 d(1.07 ±0.16)g,20 d(1.13±0.21)g,21 d(1.27±0.21)g)]明显升高(P＜0.05),自发抬足次数明显降低[19 d(6.67±1.04),20 d(6.62±1.39),21 d(6.47±1.17)](P＜0.05).与14 d给药前相比,L组小鼠术后19 d至21 d的PWMT明显升高(P＜0.05),自发抬足次数明显降低(P＜0.05).结论 骨癌痛发展过程中,脊髓水平miR-212表达量升高.连续鞘内注射LNA-anti-miR-212可以缓解骨癌小鼠痛行为.
关键词： 骨癌痛 脊髓 miR-212 LNA-anti-miR-212
