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FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血/再灌注后Akt磷酸化及海马神经元损伤的影响
目的 探讨FKBP51·PHLPP · Akt信号模块对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)后Akt磷酸化及海马CA1区迟发性神经元损伤的影响.方法 采用Pulsinelli-Brierley法制作全脑缺血损伤模型,每亚组6只动物,缺血前连续3d侧脑室注射PH结构域且富含亮氨酸重复基序的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶2(PH domain and Leucine rich repeat Protein Phosphatases,PHLPP2)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS ODN)后缺血15 min,再灌注6h,应用免疫共沉淀及免疫印记分别检测PHLPP2、FK506连接蛋白5(FK506binding protein 5,FKBP51)和蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)三者两两结合、检测Akt及其磷酸化的表达情况.再灌注5d,断头取脑,石蜡切片,苏木精-伊红染色,图像分析测定单位面积内染色细胞面积总和.I/R+ AS ODN组分别与I/R组及I/R+错义寡核苷酸(missense oligodeoxynucleotides,MS ODN)组比较,进行统计学分析.结果 单因素方差分析结果显示:与I/R+PHLPP2 MS ODN组(1.24±0.24)比较,I/R+PHLPP2 AS ODN组(1.06±0.01) PHLPP2与Akt间的两两结合水平明显受到抑制(P＜0.05)；与I/R+PHLPP2 MS ODN组(1.68±±0.1l)比较,I/R+ PHLPP2 AS ODN组(1.04±0.13) FKBP51与Akt间的两两结合水平明显受到抑制(P＜0.05)；与I/R+PHLPP2 MS ODN组(0.58±0.01)比较,I/R+PHLPP2 AS ODN组(0.76±0.02),p-Akt表达水平明显增加(P＜0.05),而Akt总蛋白表达无明显变化(P＞0.05); I/R 5 d+PHLPP2 AS ODN组[(88.3±2.7)个]与I/R+ PHLPP2 MS ODN组[(20.1±2.5)个]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FKBP51·PHLPP· Akt模块可能通过Akt信号通路参与脑缺血再灌注损伤,促进海马CA1区神经元的迟发性损伤.
