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糖尿病膀胱异常病症文献资料
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含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的:构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒表达载体(GV287-SCL),为糖尿病膀胱异常病症( DCP)的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增,与慢性病毒穿透质粒结合,构建重组穿梭质粒GV287-EGFP/SCL,共转染293T 细胞,通过多次感染、扩增和提纯,得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293 T细胞,采用Western blotting法检测目的基因,荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1036 bp,与目的基因相关片段中SCL cDNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带,其大小与目的片段人SCL cDNA相当。重组质粒GV287-EGFP/SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP,基因排序和GenBank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108 TU/mL。结论成功构建了GV287-SCL,病毒滴度为5×108 TU/mL。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。
关键词: 糖尿病膀胱异常病症 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 Cajal样间质细胞