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miRNA-299-3 p对肺癌细胞系A549迁移、增殖、凋亡、多柔比星敏感性的影响
目的 观察微小RNA-299-3p(miRNA-299-3p)对人肺癌细胞A549迁移、增殖、凋亡、多柔比星敏感性的影响.方法 以A549细胞为研究对象,首先评价miRNA-299-3p对靶基因三磷酸腺苷结合盒E1(ABCE1)的调控效应;通过CCK-8染色、划痕实验、活力分析、TUNEL染色以及蛋白印迹方法系统分析miRNA-299-3p转染的A549细胞迁移、增殖、凋亡以及对多柔比星敏感性的影响.结果 miRNA-299-3p对肺癌细胞ABCE1具有显著抑制效应.经miRNA-299-3p转染的A549细胞增殖活性、迁移等生物学特征并未受到明显影响.然而,miRNA-299-3p显著增加了A549细胞对多柔比星的敏感性,与对照组相比,同样剂量的多柔比星药物导致A549细胞活性显著下降,凋亡水平显著升高.结论 miR-299-3p靶向抑制ABCE1表达,其过表达并不能显著抑制A549细胞的增殖,但miR-299-3p联合多柔比星促进了A549细胞对多柔比星的敏感性,显著促进了A549细胞的凋亡.
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miR-639在骨肉瘤组织中的表达及其模拟物转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响
目的 观察微小RNA-639(miR-639)在骨肉瘤组织中的表达及miR-639模拟物(miR-639 mimics)转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法 通过GEO数据库和TCGA数据库分析骨肉瘤组织及癌旁组织miR-639表达情况,另分析miR-639高表达与骨肉瘤临床病理参数的关系.取U20S细胞,将miR-639 mim-ics和模拟物阳性对照(miR-NC)转染入U20S细胞中(分别计为观察组和对照组),转染后继续培养24 h,后收集细胞进行后续实验.采用CCK-8实验检测两组细胞集落形成数,EdU实验检测细胞EdU染色数,克隆形成实验检测细胞迁移细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭数,荧光定量PCR法和Western blotting法分别检测细胞TUSC5 mR-NA、蛋白.结果 GEO数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为11.2 ± 0.4、7.1 ± 0.6,两者比较,P＜0.05;TCGA数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为19.5 ± 3.4、7.7 ± 2.2,两者比较,P＜0.05.miR-639高表达与骨肉瘤肿瘤直径、淋巴结转移、解剖部位有关(P均＜0.05).观察组、对照组集落形成数分别为(155 ± 12)、(84 ± 8)个,EdU染色数分别为(14 ± 3)、(6 ± 2)个,迁移细胞数分别为(120 ± 30)、(70 ± 18)个,侵袭细胞数分别为(100 ± 16)、(52 ± 23)个,两组比较,P均＜0.05.观察组和对照组TUSC5 mRNA分别为0.18 ± 0.07、0.84 ± 0.13,TUSC5蛋白分别为0.31 ± 0.06、0.81 ± 0.09,两组比较,P均＜0.05.结论 miR-639在骨肉瘤组织中表达升高;miR-639 mimics转染促进了骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,可能与其抑制TUSC5有关.
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miRNA-138模拟物转染对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其机制
目的 观察miRNA-138模拟物(miRNA-138 mimics)对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法 选取人高侵袭性乳腺细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468)及人低侵袭性乳腺癌细胞系(MCF-7)和人正常乳腺上皮细胞系(HBL-100),qRT-PCR法检测微小 RNA-138 (miRNA-138);取 MDA-MB-231并分为两组, miRNA-138 mimics组细胞系以miRNA-138 mimics转染,miR-NC组细胞系以miR阴性对照模拟物(miR-NC)转染, qRT-PCR法检测miRNA-138,Transwell迁移和侵袭实验测算迁移细胞数、侵袭细胞数,Western blotting法检测SOX4蛋白及上皮间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白).结果 MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7、HBL-100中miRNA-138相对表达量分别为0.23 ± 0.08、0.42 ± 0.05、0.56 ± 0.11、1.03 ± 0.04,MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7与HBL-100比较,MDA-MB-231、MDA-MB-468与MCF-7比较,P均＜0.05.miRNA-138 mimics组和miR-NC组miRNA-138相对表达量分别为13.35 ± 0.35、0.98 ± 0.05,两组比较,P＜0.05.miRNA-138 mimics组和miR-NC组迁移细胞数分别为(210 ± 30)、(340 ± 18)个,侵袭细胞数分别为(100 ± 16)、(190 ± 26)个,两组比较,P均＜0.05.miRNA-138 mimics组SOX、E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白灰度值分别为0.16 ± 0.08、0.59 ± 0.16、0.42 ± 0.14、0.17 ± 0.09,miR-NC组分别为0.77 ± 0.19、0.12 ± 0.06、1.19 ± 0.21、0.44 ± 0.12,两组比较,P均＜0.05.结论 miRNA-138 mimics能够抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移,机制可能与其调控SOX4基因抑制乳腺癌细胞EMT有关.
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EIF4A1在胃癌组织中表达及其抑制剂对人胃癌细胞株增殖、存活、侵袭、迁移能力影响观察
目的 观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制.方法 淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份,采用免疫组化法检测各组织EIF4A1.取对数生长期SGC-7901细胞并分为3组,药物组加含120 μg/mL Silvestrol(在DMSO溶剂溶解)的细胞培养液100 μL,模型组加含0.5％ DMSO的细胞培养液100 μL,对照组加细胞培养液100 μL;CCK-8法检测细胞增殖活性,CountessⅡFL细胞计数仪计数活细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR法和Western blotting法分别检测EIF4A1和AKT mRNA、蛋白.结果 与癌旁正常组织比较,淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1高表达例数多(P＜0.05).各组OD值及活细胞数两两比较,P均＞0.05;与模型组、对照组比较,药物组侵袭细胞数少,细胞迁移距离长,EIF4A1和AKT蛋白、mRNA表达降低(P均＜0.05).结论 淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1表达量高于癌旁正常组织;Silvestrol不影响SGC-7901细胞的增殖、存活能力,但可抑制细胞侵袭、迁移能力,其机制可能与Silvestrol调控AKT信号通路有关.
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lncRNA-AB073614在U251细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响
目的 观察脑胶质瘤细胞U251中长链非编码RNA (lncRNA)-AB073614表达变化及小分子干扰RNA片段(si-RNA)转染对其细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法 取U251细胞、正常星形胶质细胞NHA,采用Realtime PCR法检测AB073614.随后U251细胞分别加入或不加入si-RNA转染,MTT实验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力.结果 U251、NHA细胞中AB073614表达水平分别为3.57±0.28、1.00±0.17,两者比较,P＜0.05.MTr实验显示,si-AB073614转染的U251细胞存活率低于未转染的(P＜0.05).细胞划痕实验显示,si-AB073614转染的U251细胞迁移能力低于未转染的(P＜0.05).Transwell实验显示,si-AB073614转染的U251细胞穿膜细胞数低于未转染的(P＜0.05).结论 U251细胞中lncRNA-AB073614表达升高,si-RNA转染lncRNA-AB073614能明显抑制其增殖、侵袭、迁移能力.
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FGF4在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用
目的 观察成纤维生长因4(FGF4)在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用.方法 取乳腺癌组织及癌旁正常组织各40例份,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA.培养正常乳腺细胞株MCF-10A、低转移乳腺癌细胞株T47D、高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA,Western blotting法检测FGF4蛋白.收集T47D,利用pCDNA3.1-FGF4构建过表达FGF4的T47D稳定细胞株T47D-FGF4-oe,以只转染pCDNA3.1的细胞株T47D-NC作为作为阴性对照组;收集MDA-MB-231,利用RNA干扰技术敲除FGF4构建稳定表达FGF4-shRNA的细胞株MDA-MB-231-FGF4-si,以MDA-MB-231-NC作为阴性对照组;Westernblotting法检测FGF4蛋白,MTT实验及划痕实验检测细胞增殖、迁移能力.结果 乳腺癌组织中FGF4 mRNA表达高于癌旁组织(P＜0.05).CF-10A、T47D细胞FGF4 mRNA和蛋白灰度值均低于MDA-MB-231细胞,T47D细胞FGF4蛋白灰度值低于MDA-MB-231细胞(P均＜0.05).T47 D-FGF4-oe细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度高于T47D-NC细胞,划痕距离小于T47D-NC细胞(P均＜0.05).MDA-MB-231-FGF4-si细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度低于MDA-MB-231-NC细胞,划痕距离大于MDA-MB-231-NC细胞(P均＜0.05).结论 FGF4在乳腺癌中显著高表达,并有促进乳腺癌细胞株增殖及转移的作用.
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绞股蓝总皂苷对胶质母细胞瘤细胞株U87细胞形态、迁移能力的影响
目的 观察不同剂量绞股蓝总皂苷(Gyp)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞株U87细胞形态、迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期U87细胞,分别加入10、5 mg/mL的Gyp溶液100 μL及等量PBS(分别计为A、B、C组),常规培养细胞.比较各组细胞形态、迁移能力及IL-6蛋白.结果 A组细胞生长慢、体积小、固缩现象非常明显,细胞贴壁现象接近消失;B组细胞生长缓慢,体积缩小,胞质固缩,部分细胞甚至破裂死亡,细胞贴壁现象减弱;C组细胞生长规则,轮廓清晰,形态饱满,胞体透亮,贴壁生长良好.A、B、C组细胞迁移覆盖区域占原有划痕区的54.8％、82.4％、98.6％,两两比较,P均＜0.05.A、B、C组穿膜细胞个数分别占19.8％、58.9％、100％,两两比较,P均＜0.05.A、B、C组IL-6蛋白水平分别为小量、中等量、多量,两两比较,P均＜0.05.结论 Gyp可抑制U87细胞生长及减弱细胞迁移能力,尤以10 mg/mL的Gyp效果更佳,机制可能与其可抑制IL-6蛋白表达有关.
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口腔鳞状细胞癌中CD133阳性细胞体外迁移能力的研究
目的:研究口腔鳞状细胞癌细胞中CD133高表达和CD133低表达细胞亚群的体外迁移能力.方法:流式细胞仪分选出CD133阳性(CD133+)和CD133阴性(CD133-)细胞亚群.利用Transwell和划痕实验法检测口腔癌细胞系Cal27中CD133+和CD133-的细胞亚群的迁移能力.逆转录及荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测CD133+和CD133-细胞中Snail1、Slug、Twist等上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关因子的表达情况.结果:CD133+细胞穿透膜的数目[(92.75±9.92)个]明显多于CD133-细胞[(20.12±4.55)个](P<0.05).CD133+细胞亚群划痕恢复能力[迁移细胞数(601.3±10.12)个]明显多于CD133-细胞亚群[(200.12±5.14)个](P<0.05).CD133+细胞中Snail1、Slug、Twist等mRNA表达水平显著高于CD133-细胞(P<0.05).结论:口腔鳞癌中CD133+细胞亚群具有更强的的体外迁移能力,其机制可能与EMT相关.
关键词： 口腔鳞状细胞癌 细胞迁移能力 CD133 上皮间充质转化(EMT) -
雷帕霉素及基质细胞衍生因子1α对内皮生长晕细胞生物学功能的影响
目的 观察基质细胞衍生因子1α对内皮生长晕细胞生物学功能的作用,以及探讨雷帕霉素对这种作用的影响.方法 分离脐血中单个核细胞,采用贴壁法培养内皮生长晕细胞.免疫细胞化学染色鉴定第二代细胞的内皮前体细胞特性.取第3代细胞分为四组,分别用10μg/L基质细胞衍生因子1α、10μg/L基质细胞衍生因子1α+1μg/L雷帕霉素、1μg/L雷帕霉素、普通培养液(空白对照)孵育内皮生长晕细胞24h.采用CCK-8法检测内皮生长晕细胞的增殖能力,划痕试验检测内皮生长晕细胞的迁移能力.结果 采用贴壁法培养的细胞具有多种内皮细胞特性.与10μg/L基质细胞衍生因子1α共同孵育的内皮生长晕细胞其增殖能力和迁移能力均得到活化(P＜0.01),但1μg/L雷帕霉素抑制了这种活化作用(P＜0.01).并且1μg/L雷帕霉素能够明显抑制内皮生长晕细胞的生物学功能(P＜0.05).结论 基质细胞衍生因子1α能够活化内皮生长晕细胞的增殖能力及迁移能力,雷帕霉素不但抑制内皮生长晕细胞本身的迁移能力,而且能够抑制内皮生长晕细胞的增殖能力并抵消基质细胞衍生因子1α对内皮生长晕细胞生物学功能的活化作用.
