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P2X7受体蛋白在胰腺癌中的表达及其对侵袭迁移影响的实验研究
目的:探讨P2X7受体蛋白在胰腺癌中的表达及其与临床病理之间的关系,探讨P2X7受体蛋白表达对胰腺癌侵袭迁移的影响及机制.方法:免疫组织化学法分析人胰腺癌组织及癌旁组织中P2X7受体蛋白的表达情况,分析其与胰腺癌临床病理特点之间的关系;选取胰腺癌细胞系PANC-1细胞,分别经P2X7受体激动剂BzATP(200μ mol/L)及抑制剂A740003(20 μ mol/L)处理后,Transwell实验、细胞划痕实验检测PANC-1的侵袭迁移能力变化,Western blot实验检测侵袭及迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达变化.结果:P2X7受体蛋白在胰腺癌组织中高表达,在癌旁组织中低表达;且P2X7受体蛋白表达水平与胰腺癌的临床肿瘤分化程度及淋巴结转移呈显著性相关(P＜0.05).P2X7受体蛋白可通过上调MMP2、MMP9蛋白的表达促进胰腺癌细胞的侵袭迁移.结论:P2X7受体蛋白在胰腺癌中高表达并参与调控胰腺癌的侵袭及迁移,可能成为胰腺癌治疗的潜在分子靶点.
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磷酸肌醇4磷酸调控RhoA对人脑胶质瘤细胞U87侵袭迁移的作用
目的 通过过表达或沉默磷酸肌醇4磷酸(PI4P)在人脑胶质瘤细胞U87中,了解PI4P对人脑胶质瘤U87细胞侵袭迁移的影响,探索PI4P在人脑胶质瘤发展过程中的作用机制.方法 采用LV-Helper1、LV-Helper2、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-shPI4P包装pWPXLd-PI4P及pLL3.7-shPI4P慢病毒;pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scramble、pLL3.7-shPI4P慢病毒侵染U87细胞,构建U87-GFP(过表达PI4P细胞系对照组/A1组)、U87-GFP-PI4P(过表达PI4P细胞系实验组/A2组)、U87-Scramble(沉默PI4P细胞系对照组/B1组)、U87-shPI4P(沉默PI4P细胞系实验组/B2组)细胞系;应用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹实验检测PI4P及RhoA的表达水平.结果 成功包装了pWPXLd-puro、pWPXLd-PI4P、pLL3.7-Scramble、pLL3.7-shPI4P慢病毒;构建了U87-GFP(过表达PI4P细胞系对照组)、U87-GFP-PI4P(过表达PI4P细胞系实验组)、U87-Scramble(沉默PI4P细胞系对照组)、U87-shPI4P(沉默PI4P细胞系实验组)细胞系;过表达PI4P后,U87-GFP-PI4P细胞系侵袭个数为(197.69±2.08)个,而U87-GFP系侵袭个数为(120.00±2.64)个,迁移个数分别为(70.00±0.58)、(50.00±1.02)个;沉默PI4P后,U87-shPI4P细胞系及U87-Scramble细胞系的侵袭个数分别是(79.67±1.53)、(117.00±2.00),迁移个数分别为(19.33±2.08)、(46.67±1.52)个,过表达PI4P后侵袭迁移能力明显增强(t=39.960,P=0.000;t=33.150,P=0.000),沉默PI4P后,U87细胞侵袭迁移能力显著减弱(t=25.700,P=0.000;t=18.340,P=0.000);过表达PI4P后,RhoA表达水平升高(t=17.270,P=0.000),沉默PI4P后RhoA蛋白表达水平降低(t=35.120,P=0.000).结论 在人脑胶质瘤U87细胞中,PI4P通过调节RhoA蛋白表达水平,调节人脑胶质瘤U87细胞的侵袭迁移,为脑胶质瘤的基础研究及临床治疗提供新的研究及治疗靶点.
