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副溶血性弧菌和创伤弧菌多重降落PCR体系的建立
目的:建立一种可以同时检测食源性疾病中常见病原性海洋弧菌,主要是创伤弧菌及副溶血性弧菌的多重降落PCR反应体系.方法:收集2017年3月～2017年10月食源性疾病高发期就诊的患者粪便标本进行分离培养鉴定并分析,同时针对创伤弧菌的vvhA基因、副溶血性弧菌Par col基因及16S基因靶标分别设计3对特异性引物,应用该引物建立多重降落PCR,并检测103份粪便标本,其结果与细菌培养法进行比较.结果:建立的多重降落PCR对致病菌两种基因(vvhA、col)DNA的检测下限分别为104CFU/mL、103CFU/mL;与细菌培养法相比,灵敏度可达100％,检测vvhA、col基因特异性分别为97.94％、95.12％,总特异性达96.65％.结论:所建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可直接检测由创伤弧菌和副溶血性弧菌引起的食源性感染,其结果可以直接用于临床检测.该方法可用于由创伤弧菌和副溶血性弧菌引起的食源性感染的快速诊断与流行病学调查.
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威海地区两种海洋弧菌多重降落 PCR体系的建立与应用
目的 分析威海地区食源性疾病中,海洋性弧菌的检出率,并建立一种可以同时检测创伤弧菌及溶藻弧菌的多重降落PCR反应体系.方法 收集怀疑食源性疾病患者粪便标本进行分离培养鉴定并分析,并且针对创伤弧菌的vvhA基因与溶藻弧菌的toxR基因分别设计两对特异性引物,应用Primer-BLAST检测引物特异性.应用该引物建立多重降落PCR,并检测93份粪便标本,其结果与细菌培养法进行比较结果.结果 威海地区怀疑食源性疾病患者粪便标本中共检出海洋性弧菌45例,以副溶血性弧菌为主,随后为创伤性弧菌和溶藻弧菌.所建立的多重降落PCR对致病菌两种基因(vvhA、toxR)DNA的检测下限分别为104 CFU/mL、103 CFU/mL;与细菌培养法相比,灵敏度及总灵敏度均达100％,检测vvhA、toxR基因特异性分别为96.47％ 、95.45％,总特异性达95.95％.结论 我们建立的多重降落PCR检测体系可用于由创伤弧菌和溶藻弧菌引起的食源性感染的快速诊断与流行病学调查.
