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  • 人线粒体 DNA 基因表达谱芯片的制备及鉴定

    作者:孙恒文;胡义德;曾子君;潘燚;方良毅;谭佩欣;曾向伟

    研制人线粒体 DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)表达谱芯片,鉴定芯片的特异性和稳定性,完善芯片的制备和使用程序,优化实验参数,为线粒体功能研究提供物质基础及技术保障。以人 mtDNA 剑桥序列为标准,设计 mtDNA 编码的13种 mRNA、2种 rRNA 和9种 tRNA 基因及蛋白产物定位于线粒体的核 DNA (nDNA)编码的5种凋亡相关基因寡核苷酸探针。芯片点样仪点制芯片,进行荧光显示和洗脱,用其检测人宫颈癌上皮 Hela 细胞和人肾小管上皮 Hc1细胞 cDNA 文库 mtDNA 编码基因及 nDNA 编码凋亡相关基因的差异表达情况。所点制的芯片扫描结果显示,样点分布均匀、清晰,规整度好,无漏点、连点。cDNA 文库杂交鉴定结果显示,整张芯片荧光信号均匀一致,背景清晰,各基因重复样点杂交结果一致,各质控点能正常显示。成功制备了人 mtDNA 基因表达谱芯片,完善了该芯片的制备和使用程序,通过初步应用,证明所研制的人 mtDNA 基因表达谱芯片具有特异性高、稳定性好等优点,可用于不同组织或细胞样本 cDNA 文库 mtDNA基因的差异表达分析。

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