您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
原基因表达文献资料
-
蛇毒cystatin基因合成及其在大肠杆菌的表达
目的研究蛇毒cystatin基因的合成并在大肠杆菌系统内表达.方法根据中华眼镜蛇毒cystatin蛋白的氨基酸序列合成cystatin基因的4个片段,通过缓慢退火PCR方法将其拼接为完整的cystatin基因,经BamHⅠ及SacⅠ双酶切后定向克隆到原核表达载体pET-42a(+)中,PCR及测序鉴定,转化宿主菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE凝胶电泳分析表达产物,GST·Mag琼脂糖树脂纯化融合蛋白,Western-blot鉴定.结果成功合成蛇毒cystatin基因,并构建原核表达质粒pET-42a(+)/GST-cystatin,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白GST-cystatin,SDS-PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的30%,Western-blot证实纯化蛋白为重组cystatin蛋白.结论合成蛇毒cystatin基因并在大肠杆菌中表达,为进一步研究其生物学活性及抗肿瘤转移功能奠定基础.
