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GST-TAT-GFP文献资料
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GST-TAT-GFP融合蛋白的表达、纯化及鉴定
目的 获得融合TAT短肽的融合蛋白GS-TA-GFP,以用于阐明TAT短肽的跨膜递送机理.方法 以质粒pGEX-GFP为模板,扩增目的 基因TAT-GFP,将其克隆至质粒pGEX-2T,用所构建的质粒pGEXTAT-GFP转化大肠杆菌BL21并诱导表达,利用GS-4B亲和柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot 及细胞跨膜实验鉴定.结果 大肠杆菌细胞经诱导高效表达出约54.3 kD的蛋白,其相对分子质量与GST-TAT-GFP融合蛋白相符;Western blot显示该融合蛋白能够被抗GFP的抗体特异性识别;细胞实验表明融合TAT短肽的融合蛋白能跨膜进入细胞L-02、SMMC-7721、Hela和BEL-7402.结论 在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的GS-TAT-GFP融合蛋白.
关键词： 膜融合蛋白 GST-TAT-GFP 基因表达
