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AhpC文献资料
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空肠弯曲菌AhpC蛋白的克隆表达及抗原性分析
目的 构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ah pC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础.方法 用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的染色体DNA中扩增出ah pC基因,将目的基因插入表达载体pGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E.coliBL21( DE3),IPTG诱导重组质粒pG EX-ah pC的表达.SDS-PAGE分析表达产物,采用GST标签亲和层析柱纯化表达蛋白.应用兔免疫血清、临床感染者血清以及健康无感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性并初步评价其在ELISA检测方法中的应用.结果 PCR扩增及双酶切鉴定证实重组质粒构建成功.重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为空肠弯曲菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA检测结果显示AhpC具有特异抗原性.结论 成功构建了ah pC重组表达载体pGEX-4T-1/ahpC,并在大肠杆菌中高效表达.空肠弯曲菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作为空肠弯曲菌感染后血清抗体检测的特异抗原.
