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我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
目的:研究非人灵长类动物猴子腺病毒的分子多样性.方法:采集圈养的恒河猴粪便样本,以腺病毒聚合酶基因为目的基因,用PCR方法进行扩增,对PCR阳性产物进行克隆、测序,并进行系统进化分析.结果:57只恒河猴粪便样本有12份存在腺病毒DNA,系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组（2个非重复序列）和类SAdV-7组(9个非重复序列).此外,有3个克隆,其相似序列分别为:SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52.结论:研究证实腺病毒在非人灵长类粪便中普遍存在,揭示这些动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况.
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两种恒河猴肠道腺病毒基因型分型方法的比较分析
目的 通过对两种肠道腺病毒基因型分型方法进行比较,以寻找出简便快速的肠道腺病毒基因型分型方法.方法 采集57例圈养的恒河猴粪便样本,方法一:将粪便悬液过滤上清感染BSC-1细胞,提取病变细胞的基因组DNA进行PCR扩增,然后克隆、测序,确定病毒基因型;方法二:从粪便悬液过滤上清中直接提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型.结果 57份样本中,两种方法均有12份样本检出腺病毒,阳性率为21.1%(12/57).系统进化分析显示,两种方法检出的腺病毒型别一致.提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列).此外,有三个克隆,其相似序列分别为:SAdV-1、SAdV-3和HAdV-52.结论 虽然两种方法的敏感性、特异性一样,但方法二是直接提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,而无需方法一进行3次体外细胞感染实验后从病变细胞中提取基因组DNA进行PCR扩增,节省了实验的时间及成本,特别是避免了体外细胞感染过程中可能出现的污染,因此值得推荐.
